ATRFLOX人结肠癌细胞

                                                          ATRFLOX人结肠癌细胞
产品信息：

1. 细胞基本档案

参数维度  详细信息

中文名称  ATR 条件性基因修饰人结肠癌细胞

种属/来源  人源（男性，47岁，结肠组织）

细胞形态  上皮细胞样

生长特性  贴壁生长（部分资料提示可能存在聚团现象）

基因背景  携带 loxP 位点修饰的 ATR 基因（或特定靶基因），可用于条件性敲除/激活

主要应用  DNA 损伤修复（DDR）研究、化疗耐药机制、结肠癌靶向治疗

详细培养条件

ATRFLOX 细胞的培养条件相对标准，但不同供应商可能推荐不同的基础培养基。

基础培养基：

首选： McCoy's 5a 培养基（部分供应商推荐）。

替代/常用： DMEM (高糖) 或 RPMI-1640 培养基。

建议： 收到细胞后，请优先参考供应商提供的说明书，若无特殊说明，DMEM 或 RPMI-1640 通常适用。

血清添加： 添加 10% 胎牛血清 (FBS)。

双抗： 建议添加 1% 青霉素-链霉素 (P/S)。

培养环境：

温度：37℃

气体：5% CO₂，95% 空气

湿度：饱和湿度

��️ 3. 详细操作流程指
南

细胞复苏

快速解冻： 将冻存管从液氮中取出，迅速放入 37℃ 水浴中摇晃，约 1 分钟内融化。

转移离心： 在生物安全柜内，将细胞悬液转移至含有 5-10mL 预热完全培养基的离心管中，混匀。

离心洗涤： 1000 RPM（约 150g）离心 5 分钟，弃去上清液（去除残留 DMSO）。

接种培养： 用新鲜完全培养基重悬细胞，接种至 T25 培养瓶，放入培养箱静置培养。

换液： 复苏后第二天建议换液，去除死细胞。

细胞传代

时机： 细胞密度达到 80%-90% 汇合度时。

消化液： 建议使用 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 消化液。

操作步骤：

弃去旧培养基，用无钙镁 PBS 缓冲液润洗细胞 1 次。

加入 1-2 mL 消化液，置于 37℃ 培养箱中消化 1-3 分钟，镜下观察细胞变圆脱落。

加入含血清的完全培养基终止消化，轻轻吹打混匀。

1000 RPM 离心 5 分钟，弃上清。

加入新鲜完全培养基重悬。

传代比例： 建议 1:2 至 1:3 传代。

换液频率： 每 2-3 天 更换一次培养液。

细胞冻存

冻存液配方： 推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或专用的无血清冻存液。

程序： 使用程序降温盒（或置于 -80℃ 冰箱过夜），随后转入液氮罐长期保存。

⚠️ 4. 关键注意事项 (科研应用必读)

基因稳定性（关键点）：

由于 ATRFLOX 是基因编辑细胞系，长期传代可能导致基因编辑效率下降或表型漂变。

建议： 定期通过 PCR 或 Western Blot 验证靶基因（ATR）的表达状态或重组效率。

功能研究应用：

DNA 损伤修复研究： 该细胞常用于测试 ATR 抑制剂（如 AZD6738）与化疗药物（如奥沙利铂）的协同效应。

Cre 诱导： 如果是条件性敲除细胞，可能需要通过转染 Cre 重组酶质粒或使用诱导型系统（如他莫昔芬）来激活基因修饰。

支原体检测：

必须定期检测支原体，确保无污染，以免干扰基因功能实验的结果。

运输方式：

通常采用干冰运输（冻存管）或常温运输（T25 培养瓶）。收到后请立即检查细胞状态，若为贴壁细胞运输，需静置 2-4 小时让细胞恢复贴壁后再观察。

公司正在出售的产品：

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。