稳定表达hNTCP的Huh7人肝癌细胞系；Huh7-DhNTCP 新品

产品信息：

1. 细胞基本档案

参数维度  详细信息

亲本来源  Huh7 (人肝癌细胞，源自57岁日本男性)

基因修饰  稳定转染表达 人 NTCP (hNTCP) 基因

标记基因  通常携带 嘌呤霉素 (Puromycin) 抗性基因

细胞形态  上皮细胞样

生长特性  贴壁生长

主要应用  HBV/HDV 感染模型、病毒进入机制研究、药物筛选

培养条件与培养基

Huh7-DhNTCP 细胞的培养基础与普通 Huh7 细胞类似，但为了维持 hNTCP 的表达和功能，部分实验可能需要调整血清浓度。

基础培养基： 推荐使用 DMEM (高糖) 或 William's E 基础培养基。

血清添加： 10% 胎牛血清 (FBS)。注意：血清中可能含有胆汁酸，会竞争性抑制 NTCP 的功能。在进行病毒感染或功能性实验前，通常需要进行“去血清饥饿”处理。

双抗： 1% 青霉素-链霉素 (P/S)。

筛选抗生素： 嘌呤霉素 (Puromycin)。为了维持 hNTCP 的稳定表达，防止细胞丢失质粒，通常需要在培养基中添加嘌呤霉素（常用浓度约为 1-4 μg/mL，具体需根据实验室预实验确定）。

培养环境：

温度：37℃

气体：5% CO₂，95% 空气

湿度：饱和湿度

��️ 3. 详细操作流程指南

细胞复苏

水浴预热： 37℃ 水浴锅预热。

快速解冻： 从液氮中取出冻存管，迅速放入水浴中，轻轻摇晃，直至仅剩米粒大小冰块。

离心接种： 将细胞悬液转移至含 5-10mL 预热完全培养基的离心管，1000 RPM 离心 5 分钟。弃上清，用含嘌呤霉素的新鲜培养基重悬，接种至 T25 培养瓶。

观察： 复苏后第二天换液，去除死细胞和残留 DMSO。

细胞传代

时机： 细胞密度达到 80%-90% 汇合度时。

消化液： 0.25% 胰蛋白酶 (含 EDTA)。

操作步骤：

吸去旧培养基，PBS 润洗一次（去除死细胞）。

加入适量胰酶（T25 瓶加 1mL），37℃ 培养箱消化 1-3 分钟。

显微镜下观察，待细胞间隙变大、部分变圆脱落时，加入完全培养基终止消化。

轻轻吹打混匀，离心（1000 RPM, 5min），弃上清。

加入新鲜完全培养基（含嘌呤霉素）重悬。

传代比例： 建议 1:2 至 1:4 传代。Huh7 细胞生长较快，具体比例根据细胞密度调整。

换液频率： 每 2-3 天 换液一次。

细胞冻存

冻存液： 90% FBS + 10% DMSO，或专用无血清冻存液。

程序： 使用程序降温盒或逐步降温法（4℃ 30min -> -20℃ 2h -> -80℃ 过夜 -> 转入液氮）。

⚠️ 4. 关键注意事项 (科研应用必读)

嘌呤霉素筛选（关键点）：

由于 Huh7-DhNTCP 是稳定转染细胞系，必须定期使用嘌呤霉素进行筛选。

如果长时间不加抗生素，未转染的细胞会过度生长，导致 hNTCP 表达阳性的细胞比例下降，最终导致实验失败（如无法感染 HBV）。

建议： 每传代 10 代左右，或者在进行病毒感染实验前，用嘌呤霉素进行一轮巩固筛选。

HBV/HDV 感染实验前的准备：

去血清处理： 在进行病毒感染时，通常需要将培养基更换为无血清或低血清 (2% FBS) 的培养基。因为血清中的胆汁酸会与病毒竞争结合 NTCP 受体，从而抑制感染效率。

聚乙二醇 (PEG)： 在感染培养基中通常需要添加 PEG 以促进病毒吸附。

细胞形态：

Huh7 细胞本身形态较大，呈上皮样，有时会有较长的伪足。Huh7-DhNTCP 细胞形态与亲本 Huh7 相似。如果细胞密度过低，生长可能会变慢。

公司正在出售的产品：

C4BP(Human C4 binding protein) ELISA Kit 人C4结合蛋白Multi-class antibodies规格： 48T	Sclerostin 英文名称： 骨形态发生抑制蛋白SOST抗体 0.2ml
C6orf136 英文名称： 6号染色体开放阅读框136抗体 0.2ml	IL-17 小鼠白介素-17Multi-class antibodies规格： 48T
phospho-ATG4A(Ser100) 英文名称： 0酸化自噬相关蛋白4A抗体 0.1ml	C10orf47 英文名称： 10号染色体开放阅读框47抗体 0.2ml
TNF- Alpha 小鼠坏死因子-αMulti-class antibodies规格： 48T	CDO1 英文名称： 半胱酸双加氧酶1抗体 0.2ml
Anti-GIP 胃泌素抑制肽抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml	SCHAD 英文名称： 短链L-3羟烷基辅酶A脱氢酶抗体 0.2ml
MOG ELISA Kit (human) 抗髓鞘少树突胶质细胞糖蛋白(人)Multi-class antibodies规格：	Ezrin 英文名称： 埃兹蛋白抗体 0.1ml
C9orf96 英文名称： 9号染色体开放阅读框96抗体 0.2ml	Rhesus antibody Rh MRGX1/MRGPRC/SNSR G蛋白偶联受体MRGX1抗体 规格 0.1ml
Nogo-A Ab(Human anti-Nogo-A antibody) ELISA Kit 人NOGO-A抗体Multi-class antibodies规格： 48T	PP(Mouse Protein Phosphatase) ELISA Kit 小鼠蛋酸酶Multi-class antibodies规格： 48T
Rhesus antibody Rh PCDHA4 原钙粘附蛋白α4抗体 规格 0.2ml	稳定表达hNTCP的Huh7人肝癌细胞系；Huh7-DhNTCPAFU(Human alpha-L-fucosidase) ELISA Kit 人αL岩藻糖苷酶
NFKB p52 英文名称： 细胞核因子/k基因结合核因子 p52/p100抗体 0.2ml	Rhesus antibody Rh SCAP/SREBF chaperone protein 固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白抗体 规格 0.2ml

不同类型细胞的特异性（生物特性差异）

不同类型细胞的特异性（生物特性差异）

形态多样性：细胞形态因功能而异，如成纤维细胞呈梭形或多角形，神经细胞有突起，上皮细胞呈多边形紧密排列；细菌细胞多为球形、杆状或螺旋形。

功能特异性：动物细胞依赖线粒体供能，植物细胞具叶绿体进行光合作用；原核细胞（如细菌）无细胞核，真核细胞（如动植物细胞）有核膜包裹的核；某些细胞如酵母细胞可进行出芽生殖，哺乳动物细胞则通过有丝分裂增殖。

生长特性：贴壁细胞需附着表面生长（如成纤维细胞），悬浮细胞可在培养液中自由生长（如血液细胞）；不同细胞分裂速度各异，如肿瘤细胞增殖较快，正常体细胞分裂较慢。