中华鳖肺成纤维细胞；CSSTL1

                                                          中华鳖肺成纤维细胞；CSSTL1
产品信息：

来源与背景

源自中华鳖（Pelodiscus sinensis）肺组织，由国内生物公司建系。

应用领域：

水生动物病原体（如中华鳖虹彩病毒）增殖与宿主互作研究

环境污染物（如重金属）对爬行动物细胞的毒性评估

低温适应性机制（可在26-30℃生长）。

形态与生长

形态：成纤维细胞样，呈长梭形或不规则多边形。

生长特性：严格贴壁生长，形成网状结构，增殖速度中等（传代周期3-4天）。

倍增时间：约48-72小时（28℃条件下）。

二、培养操作指南

培养体系与条件

基础培养基  MEM或M199（推荐含HEPES）

添加成分  15%胎牛血清（FBS） + 1%青霉素-链霉素（P/S）

培养环境  温度：26-28℃（推荐）或37℃ ；

气相：空气95% + CO? 5%  

传代比例  1:2至1:3（胰酶消化时间2-3分钟）

冻存条件  80%完全培养基 + 10% FBS + 10% DMSO，液氮储存

操作步骤

复苏

28℃水浴快速解冻冻存管，加入4 mL完全培养基混匀，离心（1000 RPM，4分钟）后重悬接种至T25瓶。

关键点：次日换液去除死细胞，连续观察3-4天。

传代

PBS清洗后，加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化2-3分钟（显微镜下观察细胞变圆脱落），加完全培养基终止消化。

注意事项：

消化时间需严格控制（过度消化损伤细胞）；

吹打均匀避免细胞团块。

冻存

汇合度80%时消化，离心后用冻存液重悬，程序降温（-1℃/min）至-80℃后转入液氮。

三、关键注意事项

温度敏感性

严格控温：高于30℃会导致细胞形态异常，低于25℃则生长缓慢。

试剂预热：培养基、PBS需预热至26-28℃，避免温度波动。

污染防控

定期检测支原体（推荐PCR法），避免真菌污染（培养基中可添加两性霉素B）。

实验应用

病毒增殖：细胞密度达对数期（约80%汇合度）时接种病毒。

毒理实验：推荐使用无血清培养基提高污染物检测灵敏度。

四、常见问题与解决方案

问题  原因  解决方案

贴壁不良  血清批次差异或胰酶消化过度  更换认证血清，缩短消化时间

生长缓慢  培养基pH异常或温度波动  检测培养基pH（7.2-7.4），控温28℃

细胞老化  传代次数过多（＞15代）  早期冻存主细胞库，避免长期传代

公司正在出售的产品：

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phospho-delta 1 Catenin (Tyr228) 英文名称： 0酸化δ连环蛋白抗体 0.1ml	中华鳖肺成纤维细胞；CSSTL1Avidin/AP 碱性0酸酶标记亲合素 0.1ml
Anti-CSF3/FITC 荧光素标记粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml	Anti-BSEP 胆汁酸盐输出泵蛋白抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

细胞具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。