中国仓鼠卵巢细胞-绿色荧光蛋白标记;CHO-K1- COGFP-PURO

                                                          中国仓鼠卵巢细胞-绿色荧光蛋白标记;CHO-K1- COGFP-PURO
产品信息：

1. 细胞基本特性与背景

亲本来源： 源自中国仓鼠卵巢细胞 CHO-K1（该细胞系源自成年中国仓鼠卵巢组织的亚克隆）。

标记基因：

GFP： 绿色荧光蛋白，在蓝光激发下发出明亮的绿色荧光。

Puro： 嘌呤霉素抗性基因，用于筛选和维持质粒稳定性。

细胞类型： 正常细胞（虽为永生化细胞系，但源自正常组织）。

生长特性： 贴壁生长。

细胞形态： 上皮细胞样。

应用领域： 仅限科研使用，主要用于基因表达研究、蛋白定位、细胞示踪及药物筛选。

培养条件与完全培养基配置

CHO-K1-GFP 细胞的培养基配置在不同供应商之间可能存在差异。请务必优先参考你所购买细胞随附的说明书。以下是常见的配置方案：

基础培养基：

方案一（常用）： F12K (Ham's F12 Nutrient Mixture)。

方案二： DMEM 或 DMEM/F12。

添加成分：

胎牛血清 (FBS)： 10%。

双抗 (Penicillin-Streptomycin)： 1%。

脯氨酸 (Proline)： 10 μg/mL（CHO-K1细胞生长所需，部分培养基已预含）。

嘌呤霉素 (Puromycin)： 1-10 μg/mL（用于维持筛选压力，防止GFP基因丢失。具体浓度需根据预实验确定，通常维持在2-5 μg/mL）。

培养环境：

温度： 37℃。

气相： 5% CO，95% 空气。

湿度： 70%-80%。

3. 详细培养操作指南

细胞复苏

快速解冻： 将冻存管从液氮中取出，迅速放入 37℃水浴 中，轻轻摇晃，使其在 1 分钟内完全融化。

稀释离心： 用酒精消毒管壁，将细胞悬液缓慢加入含 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中混匀。1000 rpm 离心 3-5 分钟。

重悬接种： 弃去上清，加入含嘌呤霉素的完全培养基重悬细胞，接种到 T25 培养瓶中。

静置培养： 次日观察细胞贴壁情况，建议更换新鲜培养基以去除残留的 DMSO。

细胞传代（当细胞密度达 80%-90% 时）

弃液洗涤： 弃去旧培养基，用不含钙镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

消化： 加入 0.25% 胰蛋白酶（Trypsin-EDTA，约 1-2 mL），放入 37℃ 培养箱消化 1-3 分钟。

注意：CHO-K1 细胞贴壁较牢，消化时间可能比普通细胞稍长，需在显微镜下观察。

终止消化： 待细胞间隙变大、变圆脱落时，加入含血清的培养基终止消化。

离心分瓶： 将细胞悬液转移至离心管，1000 rpm 离心 5 分钟。弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 至 1:3 的比例分装传代。

细胞冻存

收集： 按传代步骤收集处于对数生长期的细胞。

冻存液： 推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或者专用的无血清冻存液。

程序降温： 将冻存管放入程序降温盒，置于 -80℃冰箱 过夜，第二天转入 液氮罐 长期保存。

4. 关键注意事项（必读）

荧光稳定性维护（关键）：

为了维持 GFP 的明亮表达，防止基因沉默或丢失，建议在平时的培养基中维持 低浓度的嘌呤霉素筛选。

如果发现荧光变暗，可以进行高浓度嘌呤霉素的短期筛选以富集阳性细胞。

贴壁较牢：

CHO-K1 细胞属于贴壁非常牢固的细胞。传代时需要耐心等待胰酶发挥作用，切勿强行吹打，以免损伤细胞膜。

光照控制：

虽然 GFP 很稳定，但长期暴露在强光下可能会导致荧光淬灭。在非观察时间，尽量将细胞置于培养箱中避光培养。

支原体检测：

作为常用的转染宿主细胞，需定期检测支原体，确保实验环境无污染。

总结

CHO-K1-COGFP-PURO 是科研中的常用工具。培养它的核心在于维持抗生素筛选压力（以保证荧光稳定）和耐心消化（因为贴壁较牢）。只要掌握好这两点，它就能为你提供清晰的荧光信号和可靠的实验数据。

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细胞具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。