中国仓鼠卵巢细胞;CTLA4 LG-24

                                                          中国仓鼠卵巢细胞;CTLA4 LG-24
产品信息：

1. 细胞基本特性

别名：CTLA4 IG-24, CTLA4-Ig-24

种属来源：中国仓鼠（Cricetulus griseus）

组织来源：卵巢

细胞形态：上皮细胞样（多边形）

生长特性：贴壁生长

背景简介：该细胞系构建的目的是为了表达 CTLA4-Ig 融合蛋白。这种蛋白可以阻断 T 细胞活化所需的 B7-CD28 共刺激信号，在免疫学研究中具有重要价值。

生物安全等级：1级

核心参数速览

特征  描述

培养基  DMEM (高糖) + 10% FBS + 双抗

特殊添加物  0.001 mM 氨甲蝶呤 (MTX)、0.2 mM 脯氨酸

培养条件  37℃, 5% CO, 95% 空气

传代比例  1:2 ～ 1:5

倍增时间  约 14-18 小时 (生长较快)

3. 详细培养操作指南

基础培养基配置

CTLA4 Ig-24 对培养基成分有一定要求，建议严格按照以下配方配置完全培养基：

基础培养基：DMEM (高糖，Dulbecco's Modified Eagle Medium)，占 89%。

血清：优质胎牛血清 (FBS)，占 10%。

双抗：青霉素-链霉素溶液 (P/S)，占 1%。

关键添加剂：

氨甲蝶呤 (MTX)：终浓度 0.001 mM（用于筛选和维持转染基因的稳定性）。

脯氨酸：终浓度 0.2 mM（部分培养基配方要求）。

传代操作 (当细胞密度达 80%-90% 时)

弃液：吸去旧的培养上清液。

润洗：加入适量不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液，轻轻晃动润洗细胞层 1-2 次，弃去 PBS。

消化：加入 0.25% 胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 消化液（T25 瓶加 1-2 mL），置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟。

终止：在显微镜下观察，待细胞大部分变圆并脱落时，加入含血清的完全培养基终止消化。

离心：将细胞悬液转移至离心管，1000 rpm (约 100-200g) 离心 3-5 分钟。

重悬与分装：弃上清，加入新鲜完全培养基重悬细胞，按 1:2 至 1:5 的比例分装到新的培养瓶中。

冻存与复苏

冻存液：推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或专用的无血清冻存液。

冻存密度：建议密度为 1×10 ～ 1×10 个活细胞/mL。

复苏：37℃ 水浴快速摇晃解冻，立即转移至含完全培养基的离心管中混匀，离心去除上清（去除 DMSO），重悬后接种。

4. 注意事项与常见问题

运输培养基（灌液培养基）：

收到细胞后，运输用的培养基通常不再适合继续培养（可能含有抑制剂或代谢废物），请务必离心去除，并用新鲜配制的完全培养基重悬接种。

细胞脱落问题：

由于运输震动，部分贴壁不牢的细胞可能会漂浮。请将漂浮的细胞离心收集，重悬后打入原培养瓶中，不要丢弃。

MTX 的作用：

氨甲蝶呤（MTX）是筛选压力的关键。长期培养中若不添加 MTX，可能会导致外源基因（CTLA4-Ig）的表达丢失或细胞特性改变。

蛋白表达：

该细胞的主要功能是表达 CTLA4-Ig 融合蛋白。在进行相关实验时，建议通过 ELISA 或 Western Blot 验证上清液中的蛋白表达水平。

总结：CTLA4 Ig-24 是一种生长迅速的贴壁细胞，培养难度中等。关键在于维持培养基中 MTX 的浓度以保证融合蛋白的稳定表达。

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细胞具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。