人胃癌高转移细胞;MKN-28-luc-EGFP

产品信息：

1. 细胞背景与基本特性

母本细胞：MKN-28 (人胃癌细胞)

种属来源：人 (Homo sapiens)

组织来源：胃癌

供体信息：源自一位 37 岁患者的胃癌组织。

分化程度：低分化腺癌

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

标记基因：

LUC：荧光素酶，用于生物发光检测（需底物）。

EGFP：绿色荧光蛋白，用于荧光显微镜观察。

Puro：嘌呤霉素抗性，用于维持筛选压力，确保标记基因稳定。

应用领域：胃癌机制研究、抗肿瘤药物筛选、裸鼠成瘤实验及活体双模态示踪。

2. 核心参数速览

特征  描述

培养基  RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S

生长状态  贴壁生长 (上皮样)

传代比例  1:2 ～ 1:4

消化时间  1-2 分钟 (胰酶消化)

冻存条件  90% FBS + 10% DMSO 或专用无血清冻存液

3. 详细培养操作指南

MKN-28-LUC-EGFP 的培养方式与普通 MKN-28 细胞基本一致，主要区别在于培养基中通常需要添加筛选抗生素以维持双标记的稳定表达。

基础培养条件

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：饱和湿度

推荐培养基配方

基础培养基：RPMI-1640（这是 MKN-28 的标准培养基）。

血清：10% 胎牛血清 (FBS)。

双抗：1% 青霉素-链霉素 (P/S)。

筛选抗生素：嘌呤霉素 (Puromycin)。

注意：为了维持 LUC 和 EGFP 的稳定表达，建议在培养基中添加嘌呤霉素。通常维持浓度为 0.5 - 1.0 μg/mL（具体浓度需参考构建时的筛选浓度）。

传代操作 (当细胞密度达 80%-90% 时)

MKN-28 细胞贴壁较牢，呈上皮样，需用胰酶消化。

弃液：吸去旧的培养上清液。

润洗：加入适量不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液，轻轻晃动润洗细胞层 1-2 次，弃去 PBS。

消化：加入 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 消化液（T25 瓶加 1 mL），置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟。

注意：需在显微镜下观察，待细胞间隙变大、细胞大部分变圆并脱落时，立即终止消化。

终止：加入含血清的完全培养基终止消化。

离心与分装：将细胞悬液转移至离心管，1000 rpm 离心 3-5 分钟。弃上清，重悬后按 1:2 至 1:4 的比例分装到新瓶中。

冻存与复苏

冻存液：推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或专用的无血清冻存液。

复苏：37℃ 水浴快速摇晃解冻，立即转移至含完全培养基的离心管中混匀，离心去除上清（去除 DMSO），重悬后接种。

4. 注意事项与常见问题

运输中的脱落（常见问题）：

贴壁细胞在运输途中极易因震动导致脱落。收到细胞后，如果发现瓶底无细胞或细胞极少，请务必离心运输培养基，将管底沉淀的细胞团块重悬接种，不要直接丢弃。

双标记检测：

EGFP：在荧光显微镜下直接观察，细胞应呈现均匀的绿色荧光。

LUC：需加入底物（D-luciferin）后通过化学发光仪或 IVIS 成像系统检测。

筛选压力：

如果在培养过程中去除了嘌呤霉素，可能会导致荧光信号逐渐减弱。建议在实验对照组中保持抗生素筛选。

细胞状态监控：

MKN-28 细胞贴壁相对较牢，消化时间需适当控制，避免消化过度损伤细胞。

公司正在出售的产品：

AQP-2(Human Aquaporin 2) ELISA Kit 人水通道蛋白2	MAPK4(Mitogen-activated protein kinase 4) 原活化蛋白激酶4抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg
Beta-Amyloid(1-40) β淀粉样肽(1-40)(多肽蛋白) 0.1mg	C2orf65 英文名称： 2号染色体开放阅读框65抗体 0.2ml
Rhesus antibody Rh FOXN1 叉头蛋白N1抗体 规格 0.2ml	Anti-CSP (circumsporozoite protein/Plasmodium yoelii) 环子孢子蛋白(约氏)抗原 0.5mg
Rhesus antibody Rh TOP2 alpha DNA拓普西异构酶ⅡA抗体 规格 0.1ml	Caspase-12(hunman) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗原(人) 0.5mg
Anti-SLC4A4/FITC 荧光素标记碳酸氢协同转运蛋白4-A4抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml	BMPR- II (Human Bone morphogenetic protein receptor II ) ELISA Kit 人骨成型蛋白受体Ⅱ
Phospho-Cofilin (Ser3) 英文名称： 0酸化丝切蛋白抗体 0.1ml	PIBF 英文名称： 孕激素诱导阻断因子抗体 0.2ml
ACE(Human Angiotensin converting enzyme) ELISA Kit 人紧张素转化酶	Rhesus antibody Rh UGT1A9 尿苷二0酸葡萄糖醛酸转移酶1A9 规格 0.2ml
Anti-FOXM1/HFH 11 叉头蛋白M1抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml	CD19(B-lymphocyte antigen CD19) CD19 0.5mg
Rhesus antibody Rh SLC25A20 线粒体二羧酸载体蛋白20抗体 规格 0.1ml	人胃癌高转移细胞;MKN-28-luc-EGFPAnti-Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) /FITC 荧光素标记0酸化p21激活激酶1/2抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
phospho-RAC1(Ser71) 英文名称： 0酸化细胞迁移诱导因子5抗体 0.1ml	(P I NP)ELISA Kit 大鼠Ⅰ型前胶原N端前肽

不同类型细胞的特异性（生物特性差异）

不同类型细胞的特异性（生物特性差异）

形态多样性：细胞形态因功能而异，如成纤维细胞呈梭形或多角形，神经细胞有突起，上皮细胞呈多边形紧密排列；细菌细胞多为球形、杆状或螺旋形。

功能特异性：动物细胞依赖线粒体供能，植物细胞具叶绿体进行光合作用；原核细胞（如细菌）无细胞核，真核细胞（如动植物细胞）有核膜包裹的核；某些细胞如酵母细胞可进行出芽生殖，哺乳动物细胞则通过有丝分裂增殖。

生长特性：贴壁细胞需附着表面生长（如成纤维细胞），悬浮细胞可在培养液中自由生长（如血液细胞）；不同细胞分裂速度各异，如肿瘤细胞增殖较快，正常体细胞分裂较慢。