人肺癌细胞;calu-1-luc-EGFP

产品信息：

这是一份关于Calu-1-LUC-EGFP 人肺癌细胞（双荧光标记）的详细说明及标准培养操作指南。

Calu-1 是非小细胞肺癌（鳞癌）研究的经典模型。Calu-1-LUC-EGFP 是在其基础上通过基因工程手段，同时稳定表达了荧光素酶（Luciferase, LUC）和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的改造株。这种双标记设计允许研究者同时进行生物发光成像（定量）和荧光显微镜观察/流式细胞术分析（定性），极大地便利了肿瘤细胞的示踪和药效评价。

细胞基本信息

亲本来源：Calu-1 (人肺鳞癌细胞)

种属来源：人（Homo sapiens）

组织来源：肺（Lung）

供体信息：47岁男性，肺鳞癌患者

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

标记基因：

LUC：荧光素酶，用于生物发光成像（需底物荧光素）。

EGFP：增强型绿色荧光蛋白，用于荧光显微镜观察和流式检测。

培养基：McCoy's 5A + 10% FBS

细胞特性与应用

特征维度  详细描述

背景简介  源自一位 47 岁男性肺鳞癌患者的胸水样本，具有 KRAS 突变特征。

荧光特性  双标记：既表达荧光素酶（需底物激发），又表达 EGFP（激发/发射光谱约为 488/507 nm）。在荧光显微镜下呈明亮的绿色荧光。

主要应用  1. 肺癌的活体成像与肿瘤生长监测。

2. 肿瘤细胞迁移、侵袭及流式分选实验。

3. 抗肿瘤药物的体内/体外药效评价。

推荐培养体系

基础培养基：McCoy's 5A (Modified Medium)

血清添加：10% 胎牛血清 (FBS)

双抗添加：1% 青霉素-链霉素 (P/S)

筛选压力：通常伴随 Puromycin (嘌呤霉素) 或 Blasticidin (杀稻瘟菌素) 抗性（用于维持质粒稳定，具体浓度需参考构建说明书）。

培养环境：

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：维持培养箱内湿度 >90%。

详细培养操作指南

1. 细胞复苏 (Thawing)

预热：将水浴锅调至 37℃，预热完全培养基。

解冻：从液氮中取出冻存管，迅速放入 37℃ 水浴中，1-2 分钟内快速摇晃融化。

转移：用 75% 酒精擦拭冻存管外壁消毒，转入超净台。

稀释：将细胞悬液缓慢加入含有 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中（稀释 DMSO 毒性）。

离心：1000 rpm (约 250g) 离心 3-5 分钟。

接种：弃上清，加入新鲜完全培养基（含相应抗生素）重悬，接种至 T25 培养瓶中，放入培养箱静置培养。

2. 细胞传代 (Passage)

Calu-1-LUC-EGFP 为贴壁细胞。

观察：当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代。

清洗：弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液润洗细胞 1 次。

消化：加入适量消化液（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA，约 1 mL），37℃ 培养箱消化 1-2 分钟。

镜下观察：显微镜下观察，待细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台。

终止：加入含血清的完全培养基终止消化，轻轻吹打混匀。

离心：1000 rpm 离心 4-5 分钟。

重悬与分瓶：弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 到 1:3 的比例进行分瓶传代。

3. 细胞冻存 (Freezing)

状态选择：待细胞生长状态良好时进行冻存。

消化：弃去培养基，加入少量胰酶消化，待细胞变圆脱落。

收集：加入含血清的培养基终止消化，混匀后转移至离心管。

离心：1000 rpm 离心 5-10 分钟，弃上清。

重悬：加入配置好的冻存液（90% 完全培养基 + 10% DMSO）重悬细胞。

分装：转移至冻存管中，放入程序降温盒（-80℃ 过夜），随后转入液氮罐长期保存。

关键注意事项

培养基特异性：Calu-1 细胞对营养要求较为特殊，必须使用 McCoy's 5A 培养基，使用 DMEM 或 RPMI-1640 可能会导致细胞生长状态不佳。

双荧光验证：在普通倒置显微镜下，切换至 GFP 通道，可见细胞质呈现均匀的绿色荧光（EGFP）。LUC 活性需通过加底物后的生物发光成像验证。

抗性维持：为了维持双标记的稳定性，建议在培养基中持续添加相应的筛选抗生素（如 Puromycin）。若长期不加压，荧光信号可能会随传代次数增加而减弱。

运输脱落：由于运输震荡，部分细胞可能会从瓶壁脱落。若收到细胞发现瓶底有漂浮细胞团，属正常现象。请将瓶内液体转移至离心管，离心收集细胞，弃上清，用 PBS 清洗一次，再用完全培养基重悬后接种回培养瓶中。

无菌操作：所有操作必须在生物安全柜内严格无菌操作。

支原体检测：建议定期检测支原体，确保细胞无污染。

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不同类型细胞的特异性（生物特性差异）

不同类型细胞的特异性（生物特性差异）

形态多样性：细胞形态因功能而异，如成纤维细胞呈梭形或多角形，神经细胞有突起，上皮细胞呈多边形紧密排列；细菌细胞多为球形、杆状或螺旋形。

功能特异性：动物细胞依赖线粒体供能，植物细胞具叶绿体进行光合作用；原核细胞（如细菌）无细胞核，真核细胞（如动植物细胞）有核膜包裹的核；某些细胞如酵母细胞可进行出芽生殖，哺乳动物细胞则通过有丝分裂增殖。

生长特性：贴壁细胞需附着表面生长（如成纤维细胞），悬浮细胞可在培养液中自由生长（如血液细胞）；不同细胞分裂速度各异，如肿瘤细胞增殖较快，正常体细胞分裂较慢。