人胰腺癌细胞-荧光素酶标记;Capan-1-LUC

                                                          人胰腺癌细胞-荧光素酶标记;Capan-1-LUC
产品信息：

1. 细胞基本特性与背景

亲本来源： 源自人胰腺癌细胞 Capan-1（该细胞系源自一位40岁白人男性胰腺肿瘤的肝转移灶，属于胰腺导管腺癌）。

标记基因： LUC（荧光素酶），用于生物发光检测。

细胞类型： 肿瘤细胞（胰腺癌细胞）。

生长特性： 贴壁生长（部分细胞可能呈聚团生长或悬浮状态，属于正常现象）。

细胞形态： 上皮细胞样。

应用领域： 仅限科研使用，主要用于胰腺癌机制研究、抗肿瘤药物筛选及活体成像。

培养条件与完全培养基配置

Capan-1-LUC 细胞的培养基配置通常沿用 Capan-1 细胞的培养条件。

基础培养基： IMDM (Iscove's Modified Dulbecco's Medium)。

添加成分：

胎牛血清 (FBS)： 20%（Capan-1细胞生长较慢，通常需要较高血清浓度）。

双抗 (Penicillin-Streptomycin)： 1%。

培养环境：

温度： 37℃。

气相： 5% CO，95% 空气。

湿度： 饱和湿度。

3. 详细培养操作指南

细胞复苏

快速解冻： 将冻存管从液氮中取出，迅速放入 37℃水浴 中，轻轻摇晃，使其在 1 分钟内完全融化。

稀释离心： 用酒精消毒管壁，将细胞悬液缓慢加入含 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中混匀。1000 rpm 离心 3-5 分钟。

重悬接种： 弃去上清，加入完全培养基重悬细胞，接种到 T25 培养瓶中。

静置培养： 次日观察细胞贴壁情况，建议更换新鲜培养基以去除残留的 DMSO。

细胞传代（当细胞密度达 80%-90% 时）

弃液洗涤： 弃去旧培养基，用不含钙镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

消化： 加入 0.25% 胰蛋白酶（Trypsin-EDTA，约 1-2 mL），放入 37℃ 培养箱消化 1-2 分钟。

注意：Capan-1细胞贴壁较牢，且消化时间可能比普通细胞稍长，需在显微镜下观察。

终止消化： 待细胞间隙变大、变圆脱落时，加入含血清的培养基终止消化。

离心分瓶： 将细胞悬液转移至离心管，1000 rpm 离心 5 分钟。弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 至 1:3 的比例分装传代。

细胞冻存

收集： 按传代步骤收集处于对数生长期的细胞。

冻存液： 推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或者专用的无血清冻存液。

程序降温： 将冻存管放入程序降温盒，置于 -80℃冰箱 过夜，第二天转入 液氮罐 长期保存。

4. 关键注意事项（必读）

生长缓慢：

Capan-1 细胞属于生长非常缓慢的细胞系。复苏后或传代后，可能需要 1周左右 才能完全贴壁并开始明显增殖。请务必保持耐心，不要频繁换液或过度消化，这是该细胞系培养的最大难点。

混合生长状态：

Capan-1 细胞在培养过程中，常会出现部分贴壁、部分悬浮的情况。这是正常的，不要误认为是细胞死亡或污染。建议在传代时，将悬浮的细胞连同培养基一起收集，离心后与贴壁细胞合并培养。

高血清需求：

与其他胰腺癌细胞系（如PANC-1）相比，Capan-1 通常需要 20% 的高浓度胎牛血清才能维持良好的生长状态。

生物安全等级：

属于 BSL-2 细胞，操作时需在生物安全柜中进行，并穿戴适当的防护装备。

总结

Capan-1-LUC 是研究胰腺癌及进行活体成像的重要工具。培养它的核心在于极大的耐心（因为生长极慢）和细心的观察（因为存在悬浮细胞）。只要掌握好这两点，它就能为你提供稳定的发光信号和可靠的实验数据。

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细胞具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。