人卵巢癌细胞-荧光素酶标记;Caov3-LUC-PURO 新品

                                                          人卵巢癌细胞-荧光素酶标记;Caov3-LUC-PURO
产品信息：

Caov3 是卵巢癌研究中常用的细胞系，而 Caov3-LUC-PURO 是在其基础上通过基因工程手段稳定表达了荧光素酶（Luciferase, LUC）和嘌呤霉素（Puromycin）抗性基因的改造株。该细胞系结合了 Caov3 细胞的生物学特性和 LUC 的示踪能力，广泛应用于卵巢癌的活体成像、药物疗效评估及转移机制研究。

细胞基本信息

亲本来源：Caov3 (人卵巢腺癌细胞)

种属来源：人（Homo sapiens）

组织来源：卵巢（Ovary）

供体信息：54岁女性，卵巢腺癌患者

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

标记基因：

LUC：荧光素酶，用于生物发光成像（需底物荧光素）。

PURO：嘌呤霉素抗性，用于筛选和维持质粒。

培养基：DMEM + 10% FBS

细胞特性与应用

特征维度  详细描述

背景简介  Caov3 细胞于 1976 年建系，来源于一位 54 岁白人女性的卵巢腺癌组织。

荧光特性  该细胞通常不表达自发荧光蛋白（如 GFP），仅表达荧光素酶。因此在普通显微镜下无自发荧光，需通过生物发光成像（IVIS）检测。

抗性维持  培养基中通常需要添加 Puromycin (嘌呤霉素) 以维持荧光素酶标记的稳定表达。

主要应用  1. 卵巢癌肿瘤生长及药物干预的活体成像研究。

2. 卵巢癌转移及定植机制研究。

3. 抗肿瘤药物的体内/体外药效评价。

推荐培养体系

基础培养基：DMEM (高糖，High Glucose)

血清添加：10% 胎牛血清 (FBS)

双抗添加：1% 青霉素-链霉素 (P/S)

筛选压力：Puromycin (嘌呤霉素)（通常添加浓度为 0.5 - 1.0 μg/mL，具体需根据实验室条件滴定）

培养环境：

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：维持培养箱内湿度 >90%。

详细培养操作指南

1. 细胞复苏 (Thawing)

预热：将水浴锅调至 37℃，预热完全培养基。

解冻：从液氮中取出冻存管，迅速放入 37℃ 水浴中，1-2 分钟内快速摇晃融化。

转移：用 75% 酒精擦拭冻存管外壁消毒，转入超净台。

稀释：将细胞悬液缓慢加入含有 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中（稀释 DMSO 毒性）。

离心：1000 rpm (约 250g) 离心 3-5 分钟。

接种：弃上清，加入新鲜完全培养基（含 Puromycin）重悬，接种至 T25 培养瓶中，放入培养箱静置培养。

2. 细胞传代 (Passage)

Caov3-LUC-PURO 为贴壁细胞。

观察：当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代。

清洗：弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液润洗细胞 1 次。

消化：加入适量消化液（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA，约 1-2 mL），37℃ 培养箱消化 1-2 分钟。

镜下观察：显微镜下观察，待细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台。

终止：加入含血清的完全培养基终止消化，轻轻吹打混匀。

离心：1000 rpm 离心 4-5 分钟。

重悬与分瓶：弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 到 1:3 的比例进行分瓶传代。

3. 细胞冻存 (Freezing)

状态选择：待细胞生长状态良好时进行冻存。

消化：弃去培养基，加入少量胰酶消化，待细胞变圆脱落。

收集：加入含血清的培养基终止消化，混匀后转移至离心管。

离心：1000 rpm 离心 5-10 分钟，弃上清。

重悬：加入配置好的冻存液（90% 完全培养基 + 10% DMSO）重悬细胞。

分装：转移至冻存管中，放入程序降温盒（-80℃ 过夜），随后转入液氮罐长期保存。

关键注意事项

贴壁较弱：Caov3 细胞贴壁相对较弱，消化时间不宜过长，吹打要轻柔，否则容易成片脱落导致细胞损伤。

运输脱落：在运输过程中，部分细胞可能会从瓶壁脱落。若收到细胞发现瓶底有漂浮细胞团，属正常现象。请将瓶内液体转移至离心管，离心收集细胞，弃上清，用 PBS 清洗一次，再用完全培养基重悬后接种回培养瓶中。

抗性维持：为了维持 LUC 标记的稳定性，建议在培养基中持续添加 Puromycin。若长期不加压，荧光信号可能会随传代次数增加而减弱。

无菌操作：所有操作必须在生物安全柜内严格无菌操作。

支原体检测：建议定期检测支原体，确保细胞无污染。

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细胞具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。