人弥漫大B淋巴瘤细胞-荧光素酶标记;HBL-1-LUC-PURO

                                                          人弥漫大B淋巴瘤细胞-荧光素酶标记;HBL-1-LUC-PURO
产品信息：

1. 细胞背景与基本特性

母本细胞：HBL-1 (人弥漫性大 B 细胞淋巴瘤细胞)

种属来源：人 (Homo sapiens)

组织来源：淋巴瘤

生长特性：悬浮生长（淋巴母细胞样）

细胞形态：圆形，部分聚团

标记基因：

LUC：荧光素酶，可用于生物发光成像（需底物荧光素）。

PURO：嘌呤霉素抗性，用于维持筛选压力，确保标记基因的稳定表达。

应用领域：弥漫性大 B 细胞淋巴瘤（DLBCL）研究、NF-κB 信号通路研究、抗肿瘤药物筛选、裸鼠成瘤及活体示踪。

2. 核心参数速览

特征  描述

培养基  RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S

生长状态  悬浮生长 (圆形)

传代比例  1:2 ～ 1:4

冻存条件  90% FBS + 10% DMSO 或专用无血清冻存液

3. 详细培养操作指南

HBL-1-LUC-PURO 细胞的培养方式与普通 HBL-1 细胞基本一致，主要区别在于培养基中需要添加筛选抗生素以维持荧光素酶的表达。

基础培养条件

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：饱和湿度

推荐培养基配方

基础培养基：RPMI-1640。

血清：10% 胎牛血清 (FBS)。

双抗：1% 青霉素-链霉素 (P/S)。

筛选抗生素：嘌呤霉素 (Puromycin)。

注意：为了防止报告基因丢失，建议在培养基中持续添加适量的嘌呤霉素。通常维持浓度为 0.5 - 1.0 μg/mL（具体浓度需参考构建时的筛选浓度）。

传代操作 (当细胞密度达 80%-90% 或细胞浓度过高时)

HBL-1 细胞属于悬浮/半贴壁细胞（部分细胞可能贴壁不牢），操作相对简单，无需胰酶消化。

观察：在显微镜下观察细胞密度和活率。细胞呈圆形，单个或聚集成团。

收集：将培养瓶中的细胞悬液直接转移至离心管中。如果瓶底有少量贴壁细胞，可用枪头轻轻吹打下来并入悬液。

离心：1000 rpm (约 200-300g) 离心 5 分钟。

弃上清：小心吸去上清液。

重悬：加入新鲜预热的完全培养基重悬细胞沉淀。

分装：按 1:2 至 1:4 的比例分装到新瓶中。

技巧： 如果细胞聚团严重，可轻轻吹打将其吹散，但不要过度用力以免损伤细胞膜。

冻存与复苏

冻存液：推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或专用的无血清冻存液。

复苏：37℃ 水浴快速摇晃解冻，立即转移至含完全培养基的离心管中混匀，离心去除上清（去除 DMSO），重悬后接种。

4. 注意事项与常见问题

运输中的脱落（常见问题）：

悬浮细胞在运输途中极易因震动而分散。收到细胞后，如果直接观察瓶底无明显细胞沉淀，请务必先颠倒混匀或离心运输培养基，切勿直接丢弃。

细胞聚团：

HBL-1 细胞容易形成大的细胞团块。少量聚团是正常的，但如果团块过大，可能会导致中心细胞缺氧死亡。建议传代时轻轻吹散细胞团。

荧光素酶活性检测：

该细胞表达荧光素酶，可用于活体成像。在进行动物实验前，建议先在体外验证荧光素酶的表达活性（加入荧光素底物后检测发光值）。

筛选压力：

如果在培养过程中去除了嘌呤霉素（Puromycin），部分细胞可能会丢失 LUC 报告基因，导致荧光信号减弱。建议在实验对照组中保持抗生素筛选。

公司正在出售的产品：

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Anti-CCL6/C10 嗜酸粒细胞趋化蛋白CCL6抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml	Rhesus antibody Rh Phospho-Beta-Catenin (Ser552) 0酸化β 连环素蛋白抗体 规格 0.1ml
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ACV-A ELISA Kit 大鼠活化素A	Cdc2/P34CDC2/CDK1(Cell division control protein 2) 周期素依赖激酶1抗原 0.5mg
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Anti-STAT6 信号转导和转录激活因子6抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml	CDK1 (Cyclin-Dependent Kinase 1) 周期素依赖性激酶1抗原 0.5mg

细胞具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。