人肝癌细胞+GFP;hepG2-coGFP-PURO

                                                          人肝癌细胞+GFP;hepG2-coGFP-PURO
产品信息：

该细胞系是在经典的 HepG2 细胞基础上，通过慢病毒转染等基因工程手段，稳定表达了超级折叠绿色荧光蛋白（copGFP）和嘌呤霉素（Puromycin）抗性基因。它保留了亲本 HepG2 细胞的生物学特性，同时具备了荧光示踪能力，常用于肿瘤移植瘤模型、细胞迁移侵袭实验及活细胞成像研究。

细胞基本信息

亲本来源：HepG2 (人肝癌细胞)

种属来源：人（Homo sapiens）

组织来源：肝脏（Liver）

供体信息：15岁男性，肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma）

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

标记基因：

coGFP：超级折叠绿色荧光蛋白，荧光强且折叠速度快。

PURO：嘌呤霉素抗性，用于筛选和维持。

培养基：MEM (含 NEAA) 或 DMEM + 10% FBS

细胞特性与应用

特征维度  详细描述

背景简介  HepG2 细胞源自一名 15 岁白人男性的肝癌组织，具有完整的肝细胞功能，如合成清蛋白等。

荧光特性  细胞质和细胞核均呈绿色荧光（取决于启动子和定位信号），激发光/发射光约为 488nm / 507nm。

抗性维持：培养基中添加 Puromycin (嘌呤霉素) 可维持荧光稳定表达，防止基因沉默。

主要应用  1. 活体成像与肿瘤生长示踪。

2. 细胞迁移、侵袭及划痕实验的可视化。

3. 流式细胞术检测细胞周期或凋亡。

4. 病毒载体感染效率的测定。

推荐培养体系

基础培养基：MEM (含 NEAA) 或 DMEM (高糖)

血清添加：10% 胎牛血清 (FBS)

双抗添加：1% 青霉素-链霉素 (P/S)

筛选压力：Puromycin (嘌呤霉素)（建议维持浓度 1.0 - 2.0 μg/mL，具体需根据预实验滴定）

培养环境：

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：维持培养箱内湿度 >90%。

详细培养操作指南

1. 细胞复苏 (Thawing)

预热：37℃ 水浴锅预热完全培养基。

解冻：迅速将冻存管置于 37℃ 水浴中，1-2 分钟内快速摇晃融化。

转移：酒精消毒后转入超净台，将细胞悬液缓慢加入含 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中。

离心：1000 rpm (约 250g) 离心 3-5 分钟。

接种：弃上清，用完全培养基重悬，接种至 T25 培养瓶中，放入培养箱静置培养。

2. 细胞传代 (Passage)

HepG2-coGFP-PURO 为贴壁细胞。

观察：当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代。

清洗：弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液润洗细胞 1 次。

消化：加入适量消化液（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA，约 1 mL），37℃ 培养箱消化 1-3 分钟。

镜下观察：显微镜下观察，待细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台。

终止：加入含血清的完全培养基终止消化，轻轻吹打混匀。

离心：1000 rpm 离心 4-5 分钟。

重悬与分瓶：弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 到 1:3 的比例进行分瓶传代。

3. 细胞冻存 (Freezing)

状态选择：待细胞生长状态良好时进行冻存。

消化：弃去培养基，加入少量胰酶消化，待细胞变圆脱落。

收集：加入含血清的培养基终止消化，混匀后转移至离心管。

离心：1000 rpm 离心 5-10 分钟，弃上清。

重悬：加入配置好的冻存液（90% 完全培养基 + 10% DMSO）重悬细胞。

分装：转移至冻存管中，放入程序降温盒（-80℃ 过夜），随后转入液氮罐长期保存。

关键注意事项

荧光观察：在普通倒置显微镜下，切换至 GFP 荧光通道，可见细胞质和细胞核呈现均匀的绿色荧光。若荧光变暗，提示标记基因可能丢失，需加强嘌呤霉素筛选。

抗性维持：为了维持 coGFP 标记的稳定性，建议在培养基中持续添加 Puromycin。若用于动物实验接种，需确认动物体内无抗生素干扰。

贴壁特性：HepG2 细胞贴壁相对较牢，但消化后容易聚团。传代时需吹打均匀，防止细胞成团生长影响实验结果。

运输脱落：若收到细胞发现瓶底有漂浮细胞团，属正常现象。请将瓶内液体转移至离心管，离心收集细胞，弃上清，用 PBS 清洗一次，再用完全培养基重悬后接种回培养瓶中。

支原体检测：建议定期检测支原体，确保细胞无污染。

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环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。