人肺鳞癌细胞+LUC;NCI-H226-LUC-PURO

1. 细胞基本特性与背景：

亲本来源： 源自人肺鳞状细胞癌细胞 NCI-H226（该细胞系于1980年分离建立，源自胸腔积液）。

标记基因：

LUC： 萤火虫荧光素酶，用于生物发光检测。

Puro： 嘌呤霉素抗性基因，用于筛选和维持质粒稳定性。

细胞类型： 肿瘤细胞（肺鳞癌细胞）。

生长特性： 贴壁生长。

细胞形态： 上皮细胞样。

应用领域： 仅限科研使用，主要用于肺癌机制研究、抗肿瘤药物筛选及活体成像（Bioluminescence Imaging）。

2. 培养条件与完全培养基配置

NCI-H226-LUC-PURO 细胞的培养条件通常沿用 NCI-H226 的培养条件，但为了维持标记基因的表达，通常需要添加抗生素筛选。

基础培养基： DMEM（高糖）。

添加成分：

胎牛血清 (FBS)： 10%。

双抗 (Penicillin-Streptomycin)： 1%。

嘌呤霉素 (Puromycin)： 1.0 μg/mL（根据具体供应商说明书调整，通常用于维持筛选压力，防止荧光素酶基因丢失）。

培养环境：

温度： 37℃。

气相： 5% CO，95% 空气。

湿度： 饱和湿度。

3. 详细培养操作指南

细胞复苏

快速解冻： 将冻存管从液氮中取出，迅速放入 37℃水浴 中，轻轻摇晃，使其在 1 分钟内完全融化。

稀释离心： 用酒精消毒管壁，将细胞悬液缓慢加入含 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中混匀。1000 rpm 离心 3-5 分钟。

重悬接种： 弃去上清，加入含嘌呤霉素的完全培养基重悬细胞，接种到 T25 培养瓶中。

静置培养： 次日观察细胞贴壁情况，建议更换新鲜培养基以去除残留的 DMSO。

细胞传代（当细胞密度达 80%-90% 时）

弃液洗涤： 弃去旧培养基，用不含钙镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

消化： 加入 0.25% 胰蛋白酶（Trypsin-EDTA，约 1-2 mL），放入 37℃ 培养箱消化 1-2 分钟。

注意：NCI-H226 细胞贴壁较牢，需在显微镜下观察，待细胞大部分变圆并脱落时进行下一步。

终止消化： 加入含血清的培养基终止消化。

离心分瓶： 将细胞悬液转移至离心管，1000 rpm 离心 5 分钟。弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 至 1:3 的比例分装传代。

细胞冻存

收集： 按传代步骤收集处于对数生长期的细胞。

冻存液： 推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或者专用的无血清冻存液。

程序降温： 将冻存管放入程序降温盒，置于 -80℃冰箱 过夜，第二天转入 液氮罐 长期保存。

4. 关键注意事项（必读）

荧光素酶表达稳定性（关键）：

为了维持 LUC 的稳定表达，建议在平时的培养基中维持 低浓度的嘌呤霉素筛选。

如果发现荧光强度减弱，可以进行高浓度嘌呤霉素的短期筛选以富集阳性细胞。

贴壁较牢：

NCI-H226 细胞属于贴壁非常牢固的细胞。传代时需要耐心等待胰酶发挥作用，切勿强行吹打，以免损伤细胞膜。

生长速度：

该细胞生长速度属于中等，倍增时间约为 60 小时左右。传代后通常需要 2-3 天才能长满。

生物安全等级：

属于 BSL-2 细胞，操作时需在生物安全柜中进行，并穿戴适当的防护装备。

总结

NCI-H226-LUC-PURO 是研究肺鳞癌及进行活体成像的理想工具。培养它的核心在于控制消化时间（因为贴壁较牢）和维持抗生素筛选压力（以保证荧光素酶的持续表达）。只要掌握好这两点，它就能为你提供稳定的发光信号和可靠的实验数据。

公司正在出售的产品：

不同类型细胞的特异性（生物特性差异）

形态多样性：细胞形态因功能而异，如成纤维细胞呈梭形或多角形，神经细胞有突起，上皮细胞呈多边形紧密排列；细菌细胞多为球形、杆状或螺旋形。

功能特异性：动物细胞依赖线粒体供能，植物细胞具叶绿体进行光合作用；原核细胞（如细菌）无细胞核，真核细胞（如动植物细胞）有核膜包裹的核；某些细胞如酵母细胞可进行出芽生殖，哺乳动物细胞则通过有丝分裂增殖。

生长特性：贴壁细胞需附着表面生长（如成纤维细胞），悬浮细胞可在培养液中自由生长（如血液细胞）；不同细胞分裂速度各异，如肿瘤细胞增殖较快，正常体细胞分裂较慢。