人胶质母细胞瘤+LUC;T98G-LUC-PURO

产品信息：

1. 细胞背景与基本特性

母本细胞：T98G (人胶质母细胞瘤细胞)

种属来源：人 (Homo sapiens)

组织来源：脑（额叶肿瘤）

供体信息：源自一位 61 岁男性患者的胶质母细胞瘤组织。

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样（多边形，铺路石状）

标记基因：

LUC：荧光素酶，可用于生物发光成像（需底物荧光素）。

PURO：嘌呤霉素抗性，用于维持筛选压力，确保标记基因的稳定表达。

应用领域：神经胶质瘤机制研究、抗肿瘤药物筛选、裸鼠脑内成瘤实验及活体示踪。

2. 核心参数速览

特征  描述

培养基  MEM + 10% FBS + 1% P/S

生长状态  贴壁生长 (上皮样)

传代比例  1:2 ～ 1:4

消化时间  1-3 分钟 (胰酶消化)

冻存条件  90% FBS + 10% DMSO 或专用冻存液

3. 详细培养操作指南

T98G-LUC-PURO 细胞的培养方式与普通 T98G 细胞基本一致，主要区别在于培养基中需要添加筛选抗生素以维持荧光素酶的表达。

基础培养条件

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：饱和湿度

推荐培养基配方

基础培养基：MEM (Minimum Essential Medium)（通常需添加 NEAA 非必需氨基酸）。

血清：10% 胎牛血清 (FBS)。

双抗：1% 青霉素-链霉素 (P/S)。

筛选抗生素：嘌呤霉素 (Puromycin)。

注意：为了防止报告基因丢失，建议在培养基中持续添加适量的嘌呤霉素。通常维持浓度为 1-2 μg/mL（具体浓度需参考构建时的筛选浓度）。

传代操作 (当细胞密度达 80%-90% 时)

T98G 细胞贴壁较牢，呈上皮样，需用胰酶消化。

弃液：吸去旧的培养上清液。

润洗：加入适量不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液，轻轻晃动润洗细胞层 1-2 次，弃去 PBS。

消化：加入 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 消化液（T25 瓶加 1 mL），置于 37℃ 培养箱中消化 1-3 分钟。

注意：需在显微镜下观察，待细胞间隙变大、细胞回缩变圆并开始脱落时，立即终止消化。

终止：加入含血清的完全培养基终止消化。

离心与分装：将细胞悬液转移至离心管，1000 rpm 离心 5 分钟。弃上清，重悬后按 1:2 至 1:4 的比例分装到新瓶中。

冻存与复苏

冻存液：推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或专用的无血清冻存液。

复苏：37℃ 水浴快速摇晃解冻，立即转移至含完全培养基的离心管中混匀，离心去除上清（去除 DMSO），重悬后接种。

4. 注意事项与常见问题

运输中的脱落（常见问题）：

贴壁细胞在运输途中可能因震动导致部分或全部脱落。收到细胞后，如果发现瓶底无细胞或细胞极少，请务必离心运输培养基，将管底沉淀的细胞团块重悬接种，不要直接丢弃。

荧光素酶活性检测：

该细胞表达荧光素酶，可用于活体成像。在进行动物实验前，建议先在体外验证荧光素酶的表达活性（加入荧光素底物后检测发光值）。

筛选压力：

如果在培养过程中去除了嘌呤霉素（Puromycin），部分细胞可能会丢失 LUC 报告基因，导致荧光信号减弱。建议在实验对照组中保持抗生素筛选。

细胞密度监控：

T98G 细胞在低密度下生长可能较慢，建议保持适当的密度传代。

总结：T98G-LUC-PURO 是一种贴壁生长的标记胶质瘤细胞系。它的培养关键在于回收运输后脱落的细胞以及添加嘌呤霉素（PURO）以维持荧光素酶表达。该细胞系是脑肿瘤活体示踪和药效评价的有力工具。

公司正在出售的产品：

不同类型细胞的特异性（生物特性差异）

形态多样性：细胞形态因功能而异，如成纤维细胞呈梭形或多角形，神经细胞有突起，上皮细胞呈多边形紧密排列；细菌细胞多为球形、杆状或螺旋形。

功能特异性：动物细胞依赖线粒体供能，植物细胞具叶绿体进行光合作用；原核细胞（如细菌）无细胞核，真核细胞（如动植物细胞）有核膜包裹的核；某些细胞如酵母细胞可进行出芽生殖，哺乳动物细胞则通过有丝分裂增殖。

生长特性：贴壁细胞需附着表面生长（如成纤维细胞），悬浮细胞可在培养液中自由生长（如血液细胞）；不同细胞分裂速度各异，如肿瘤细胞增殖较快，正常体细胞分裂较慢。