GOX基因检测试剂盒（恒温荧光法）

检测靶标：GOX 基因（葡萄糖氧化酶基因）。

主要用途：

转基因筛查：用于检测农作物植株、种子、饲料或食品（如米粉、面粉、豆制品、婴幼儿辅食等）中是否含有转基因成分。

科研应用：用于分子生物学实验中，对特定菌株或样本中的 GOX 基因进行定性或定量分析。

技术特点：采用恒温荧光法（通常基于 LAMP 或类似恒温扩增技术），无需复杂的 PCR 仪，只需恒温设备即可快速获得结果。

 2. 检测原理

该试剂盒基于恒温扩增技术（Isothermal Amplification），结合荧光实时监测。

核心原理：

恒温扩增：利用特异性引物在恒定温度（通常为 60-65℃ 或 39℃，视具体酶系而定）下对 GOX 基因进行扩增。

荧光检测：

探针法（TaqMan类似）：使用特异性荧光探针（FAM标记），探针两端分别标记荧光基团和淬灭基团。扩增时，酶切降解探针释放荧光。

染料法（SYBR Green）：荧光染料特异性结合双链 DNA 小沟，在紫外或蓝光激发下发出荧光，荧光强度与扩增产物量成正比。

优势：相比传统 PCR，该方法反应速度快（通常 30-60 分钟），操作简便（无需热循环），且灵敏度高。

3. 试剂盒组成 (典型配置)

一个标准的 48 测试（48T）试剂盒通常包含以下组分：

组分名称 规格 (示例) 作用 保存条件

恒温扩增反应液 48T 含 dNTPs、缓冲液 -20℃

引物/探针混合液 48T 识别 GOX 基因特异序列 -20℃

B Buffer (酶) 2.5 μL/管 含恒温扩增酶系 -20℃

阳性对照 1管 含 GOX 靶基因片段的质粒 -20℃

阴性对照 1管 无菌生理盐水或缓冲液 -20℃

A Buffer (缓冲液) 1管 反应辅助液 -20℃

 4. 操作流程详解

第一步：样本前处理与 DNA 提取

样本类型：农作物植株、食品粉末、饲料等。

提取：使用商品化 DNA 提取试剂盒或快速裂解液提取样本中的总 DNA。

第二步：反应体系配置 (以 50 μL 体系为例)

在冰上配制混合液：

A Buffer: 32.9 μL

引物/探针混合液: 4.6 μL (或上游/下游引物各 2 μL，探针 0.6 μL)

模板 DNA: 2 μL (阳性/阴性对照或样本)

ddHO: 补足体积

B Buffer (酶): 2.5 μL (最后加入)

第三步：恒温扩增与检测

仪器设置：荧光 PCR 仪或恒温荧光检测仪。

反应程序：

预变性/酶活化：95℃ 2-5 分钟 (部分体系需要)。

恒温扩增：60-65℃ (或 39℃，具体视说明书而定)，扩增 40-60 个循环，每循环采集荧光信号。

结果判读：

阳性：反应管发出绿色荧光（或 FAM 通道出现典型的“S”型扩增曲线，Ct 值 ≤ 35）。

阴性：反应管无荧光（或无扩增曲线）。

 5. 关键注意事项

防污染：

由于试剂盒灵敏度极高，极易受气溶胶污染。建议设置阴性对照，且扩增反应结束后严禁开盖，直接丢弃于密封袋中。

试剂保存与使用：

试剂盒需在 -20℃ 避光保存。

避免反复冻融，尤其是酶混合液和探针液。

使用前需在室温下充分融化，并瞬时离心使管壁液体沉底。

仪器兼容性：

若使用荧光定量 PCR 仪，需在软件中选择 FAM 或 SYBR Green 通道，并将淬灭基团设为 None 或 MGB（视具体探针设计而定）。

 总结

GOX 基因检测试剂盒（恒温荧光法）是一种针对转基因成分筛查的专用工具。它利用恒温扩增技术，无需复杂的热循环设备，即可快速、灵敏地检测出样本中是否含有 GOX 基因。其操作简便、结果直观（闭管检测），非常适合在实验室、现场检测或高通量筛查中使用。