H10 亚型流感病毒检测试剂盒 新品

H10 亚型流感病毒检测试剂盒

主要应用：

兽医诊断： 检测家禽（鸡、鸭、鹅）是否感染H10亚型禽流感。

公共卫生监测： 辅助诊断人类不明原因肺炎，排查H10亚型感染。

环境监测： 检测活禽市场、养殖场环境（粪便、污水）中的病毒载量。

检测意义： H10亚型病毒变异较快，特异性检测有助于早期发现疫情，防止病毒扩散及潜在的大流行风险。

 2. 检测原理

该试剂盒采用实时荧光定量RT-PCR（TaqMan探针法）技术：

逆转录（RT）： 将样本中的病毒RNA反转录成cDNA。

特异性扩增： 针对H10亚型HA基因的高度保守区域设计特异性引物和探针（通常标记FAM荧光基团）。

荧光检测： 在PCR扩增过程中，探针被Taq酶水解，荧光基团与淬灭基团分离，发出荧光信号。通过实时监测荧光信号的增加，实现对病毒核酸的定性或定量检测。

3. 试剂盒组成 (以50测试规格为例)

组分名称 规格/体积 保存条件 功能说明

PCR反应液 含引物、探针、dNTPs -20℃避光 核心预混液，包含扩增所需大部分成分

酶混合液 含逆转录酶、Taq酶 -20℃ 催化逆转录和PCR扩增反应

阳性对照 1管 -20℃ 含H10亚型目的基因的质粒或假病毒

阴性对照 1管 4℃或-20℃ 无菌双蒸水或缓冲液

说明书 1份 常温 操作指南及判读标准

 4. 样本要求与操作流程

第一步：样本采集

样本类型：

禽类/兽医样本： 咽喉拭子、泄殖腔拭子、脏器组织（脾、肺、脑）。

人医样本： 鼻咽拭子、口咽拭子、痰液、肺泡灌洗液。

环境样本： 粪便悬液、污水、鸡胚尿囊液。

保存运输： 2-8℃保存并尽快送检；长期保存需置于-70℃。

第二步：核酸提取

方法： 使用配套的病毒RNA提取试剂盒（磁珠法或离心柱法）。

关键： RNA极易降解，操作过程应在冰上进行，并使用无RNase的耗材。

第三步：PCR反应体系配制

解冻： 将反应液和酶液在冰上解冻，振荡混匀并瞬时离心。

配制： 按说明书比例混合PCR反应液、酶混合液。

分装： 将混合液分装至PCR反应管中（通常为20μL体系）。

第四步：加样

向反应管中加入提取好的RNA模板（通常为5-10 μL）。

注意： 阳性对照应最后加入，且需更换枪头，防止污染。

第五步：上机扩增

仪器： ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96等。

荧光通道： 选择 FAM 通道（报告基团）。

反应程序（参考）：

逆转录： 42℃-50℃，10-15分钟（1个循环）。

预变性： 95℃，3-5分钟（1个循环）。

PCR循环： 95℃变性15秒，60℃退火/延伸30-45秒（采集荧光），共40-45个循环。

 5. 结果判读标准

有效实验判定：

阴性对照（NC）： 无Ct值（或Ct值 > 40），扩增曲线为直线。

阳性对照（PC）： Ct值 ≤ 36，扩增曲线呈典型的“S”型。

样本结果判定：

阳性 (+)： Ct值 ≤ 36，且扩增曲线呈明显的“S”型。表明样本中检测到H10亚型流感病毒核酸。

阴性 (-)： Ct值 > 40 或 无Ct值。表明样本中未检测到H10亚型流感病毒。

可疑 (灰区)： Ct值在 36-40之间。

建议：重新提取核酸或复测。若复测Ct值 < 40且曲线正常，则判为阳性；否则判为阴性。

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