H7N4 亚型禽流感病毒检测试剂盒 新品

H7N4 亚型禽流感病毒检测试剂盒

1. 产品概述与应用

产品名称： H7N4亚型禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法/RT-PCR法）。

检测目标： 甲型流感病毒H7亚型中的H7N4特异性基因序列。

主要应用：

兽医临床诊断： 检测家禽（鸡、鸭等）是否感染H7N4病毒。

环境监测： 检测活禽市场、养殖场环境样本（如粪便、污水）中的病毒。

科研用途： 病毒学研究、流行病学调查、疫苗研发等。

检测意义： H7亚型病毒具有变异快的特点，特异性检测有助于区分不同亚型，防止疫情扩散。

 2. 检测原理

该试剂盒通常采用TaqMan荧光探针法：

逆转录（RT）： 将样本中的病毒RNA反转录成cDNA。

特异性扩增： 针对H7N4病毒的血凝素（HA）或神经氨酸酶（NA）基因保守区域设计特异性引物和探针。

荧光检测： 在PCR扩增过程中，荧光探针被切断，释放出荧光信号。通过实时监测荧光信号的增加，实现对病毒核酸的定性或定量检测。

3. 试剂盒组成

以常见的50次/盒规格为例，试剂盒通常包含以下组分：

组分名称 规格/体积 保存条件 功能说明

PCR反应液 含引物、探针、dNTPs -20℃避光 核心反应成分，通常已预混

酶混合液 含逆转录酶、Taq酶 -20℃ 催化逆转录和PCR扩增反应

阳性对照 1管 -20℃ 含H7N4基因片段的质粒或假病毒

阴性对照 1管 4℃或-20℃ 无菌生理盐水或缓冲液

说明书 1份 常温 操作指南及判读标准

 4. 样本要求与操作流程

第一步：样本采集

样本类型：

拭子样本： 咽喉拭子、泄殖腔拭子。

组织样本： 肺、脾、气管等脏器组织。

液体样本： 粪便悬液、气管冲洗液。

保存： 采集后立即放入病毒采样管，2-8℃保存并尽快送检；长期保存需置于-70℃。

第二步：核酸提取

方法： 使用配套的病毒RNA提取试剂盒（如磁珠法或柱提法）。

注意： RNA极易降解，操作过程应在冰上进行，并使用无RNase的耗材。

第三步：PCR反应体系配制

解冻： 将反应液和酶液在冰上解冻，振荡混匀并瞬时离心。

配制： 按说明书比例混合反应液、酶液。

分装： 将混合液分装至PCR反应管中（通常为20μL体系）。

第四步：加样

向反应管中加入提取好的RNA模板（通常为5-10 μL）。

设置阴性对照和阳性对照。

第五步：上机扩增

仪器： ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96等。

荧光通道： 选择 FAM 通道（报告基团）。

程序（参考）：

逆转录： 42℃-50℃，10-15分钟（1个循环）。

预变性： 95℃，3-5分钟（1个循环）。

PCR循环： 95℃变性15秒，60℃退火/延伸30-45秒（采集荧光），共40-45个循环。

 5. 结果判读标准

有效实验判定：

阴性对照（NC）： 无Ct值（或Ct值 > 40），扩增曲线为直线。

阳性对照（PC）： Ct值 ≤ 36，扩增曲线呈典型的“S”型。

样本结果判定：

阳性 (+)： Ct值 ≤ 36，且扩增曲线呈明显的“S”型。表明样本中检测到H7N4亚型禽流感病毒核酸。

阴性 (-)： Ct值 > 40 或 无Ct值。表明样本中未检测到H7N4亚型禽流感病毒。

可疑 (灰区)： Ct值在 36-40之间。

建议：重新提取核酸或复测。若复测Ct值 < 40且曲线正常，则判为阳性；否则判为阴性。

 6. 注意事项与生物安全

生物安全： 禽流感病毒属于传染性病原体，样本处理必须在生物安全二级（BSL-2）或以上实验室中进行。

防污染： PCR检测灵敏度极高，必须严格分区操作（试剂准备区、样本制备区、PCR扩增区），防止气溶胶污染。

试剂稳定性： 酶混合液对温度敏感，应避免反复冻融，使用后立即放回-20℃保存。

仅限科研/检测： 大多数此类试剂盒标注仅用于科研或兽医临床辅助诊断，严禁用于临床医疗。

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