H7N9 亚型禽流感病毒检测试剂盒 / 含内标

H7N9 亚型禽流感病毒检测试剂盒 / 含内标

1. 产品概述与应用：

产品名称： H7N9亚型禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法，含内标）。

检测目标：

FAM通道： H7N9病毒特异性基因（通常为HA或NA基因）。

VIC/HEX通道： 内标基因（Internal Control）。

主要应用：

临床诊断： 辅助诊断人或禽类是否感染H7N9禽流感病毒。

流行病学调查： 疫情监测与溯源。

科研用途： 病毒载量测定、药物评价等。

 2. 检测原理

该试剂盒采用双重实时荧光定量RT-PCR（TaqMan探针法）技术：

双重反应： 在同一个PCR反应管中，同时进行H7N9病毒检测和内标检测。

荧光标记：

FAM通道： 标记H7N9特异性探针。若样本中有H7N9病毒，该通道会扩增并发出荧光。

VIC/HEX通道： 标记内标（IC）探针。无论样本中是否有病毒，该通道都应正常扩增。

内标作用：

内源性内标： 检测人/动物样本中的管家基因（如β-actin），用于确认样本采集是否成功（如拭子是否刮到了细胞）。

外源性内标： 检测加入的外部质控品，用于确认提取试剂和PCR仪是否正常工作。

3. 试剂盒组成 (以50测试规格为例)

组分名称 规格/体积 保存条件 功能说明

PCR反应液 含引物、探针、dNTPs -20℃避光 预混液，包含检测H7N9和内标的引物探针

酶混合液 含逆转录酶、Taq酶 -20℃ 催化逆转录和PCR扩增

阳性对照 1管 -20℃ 含H7N9目的基因的质粒或灭活病毒

阴性对照 1管 4℃或-20℃ 无菌生理盐水

内标（IC） (通常已预混或单独提供) -20℃ 用于监控提取和扩增过程

 4. 操作流程详解

第一步：样本采集

样本类型： 鼻咽拭子、口咽拭子、痰液、肺泡灌洗液、血清或禽类组织/泄殖腔拭子。

保存： 采集后立即放入病毒采样管，2-8℃保存并尽快送检；长期保存需置于-70℃。

第二步：核酸提取

方法： 使用配套的病毒RNA提取试剂盒。

关键点： 如果试剂盒要求“内标参与提取”，则需在提取前向样本中加入内标溶液，使内标与病毒核酸一同经历提取过程。

第三步：PCR反应体系配制

解冻： 将反应液和酶液在冰上解冻，振荡混匀并瞬时离心。

配制： 按说明书比例混合反应液和酶液。

分装： 将混合液分装至PCR反应管中。

第四步：加样

向反应管中加入提取好的RNA模板（通常为5-10 μL）。

第五步：上机扩增

仪器： ABI 7500、LightCycler 480等。

通道设置：

Reporter Dye: FAM (H7N9), VIC/HEX (内标)

Quencher Dye: None

程序（参考）：

逆转录：42℃-50℃，10-15分钟。

预变性：95℃，3-5分钟。

PCR循环：95℃ 15秒，60℃ 30-45秒（采集荧光），40-45个循环。

 5. 结果判读标准

有效实验判定：

阴性对照： FAM通道无Ct值，VIC通道（内标）应无Ct值或Ct值异常（取决于内标类型）。

阳性对照： FAM通道Ct值 ≤ 35，且扩增曲线正常。

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