N2 亚型流感病毒检测试剂盒 新品

市面上的 N2 亚型检测试剂盒主要分为两类：

实时荧光定量 RT-PCR 法（主流）

原理：利用 TaqMan 探针法，针对 N2 亚型基因组的高度保守区域设计特异性引物和探针。

荧光标记：探针通常标记 FAM 荧光基团。

内标系统：部分试剂盒会加入内源性内标（如 VIC/HEX 通道），用于监测试剂盒是否失效以及样本中是否存在 PCR 抑制物。

特点：特异性强，灵敏度高，可定量，是目前的“金标准”。

RT-LAMP 法（恒温扩增）

原理：利用 4-6 条引物识别靶序列的 6-8 个位点，在恒温（60℃-65℃）下进行扩增。

特点：无需昂贵的 PCR 仪，反应速度快（通常 60 分钟内），肉眼观察颜色变化或荧光信号即可判读，适合现场快速检测。

 2. 试剂盒组成

以常见的 50 测试/盒规格为例：

组分名称 主要功能 保存条件

PCR 反应液 / 2× Mix 含 dNTPs、缓冲液、Mg2 -20℃ 避光保存

酶液 (Taq/RT-Enzyme) 催化 DNA/RNA 扩增 -20℃ 保存

引物/探针混合液 特异性识别 N2 亚型保守序列 -20℃ 避光保存

阳性质控品 含 N2 亚型目标片段的质粒或灭活病毒 -20℃ 保存

阴性质控品 无菌生理盐水或缓冲液 4℃ 或 -20℃ 保存

 3. 适用范围与背景

检测对象：主要针对甲型流感病毒 N2 亚型（包括禽流感病毒 N2 亚型、猪流感病毒 N2 亚型）。

应用领域：动物疫病监测（如禽类养殖场、猪场）、出入境检验检疫、科研实验。

检测样本：咽拭子、鼻拭子、泄殖腔拭子、组织匀浆、血清等。

灵敏度：通常最低检测限可达 103 - 10 拷贝/mL，能检出极低浓度的病毒。

 4. 操作流程简述 (以荧光 PCR 法为例)

样本前处理：

核酸提取：使用病毒 DNA/RNA 提取试剂盒从样本中提取核酸。

体系配置：

在冰上将反应液、酶液、引物探针混合。

分装至 PCR 管中，加入提取好的核酸模板。

上机扩增：

程序设置：

逆转录：42℃-50℃ (仅限一步法 RT-PCR)

预变性：95℃ 5 min

扩增循环 (40-45 cycles)：95℃ 15 sec → 60℃ 30-60 sec (收集荧光)

结果判读：

阳性：扩增曲线呈典型的“S”型，且 Ct 值 ≤ 35-40（具体阈值视说明书而定）。

阴性：无扩增曲线，或 Ct 值 > 40。

无效：阳性对照未扩增或阴性对照出现扩增。

 5. 关键注意事项

严格防污染：

PCR 检测极易受污染影响，实验室必须严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），严禁物品交叉使用。

严禁在扩增区打开扩增后的 PCR 管盖。

储存与运输：

试剂盒通常需要 -20℃ 避光保存。

避免反复冻融：反复冻融次数通常限制在 3-5 次以内，否则会影响酶活性。

生物安全：

处理禽类组织或泄殖腔拭子时，需在生物安全柜中操作，防止气溶胶吸入。

 总结

如果你是在科研机构或兽医实验室工作，建议优先选择荧光 PCR 法试剂盒以获得最准确的定量结果；如果需要在养殖场或现场进行快速排查，RT-LAMP 法试剂盒是更便捷的选择。