N7 亚型流感病毒检测试剂盒

N7 亚型流感病毒检测试剂盒

试剂简介：

产品名称： 流感病毒N7亚型检测试剂盒（通常为荧光PCR法或RT-PCR法）。

检测目标： 甲型流感病毒的N7基因（神经氨酸酶N7亚型）。

主要应用：

人医临床： 辅助诊断由H7N7或H7N9等病毒引起的流感样症状，特别是针对有禽类接触史的患者。

动物防疫/兽医： 检测家禽（鸡、鸭）或猪群中的禽流感病毒，进行流行病学监测。

环境监测： 检测活禽市场、养殖场环境样本（如污水、笼具擦拭物）中的病毒。

检测意义： N7亚型常与高致病性禽流感相关，快速检测有助于疫情的早期预警和防控。

 2. 检测原理

该类试剂盒主要采用实时荧光定量RT-PCR（探针法）：

逆转录（RT）： 由于流感病毒是RNA病毒，试剂盒首先利用逆转录酶将样本中的病毒RNA反转录成cDNA。

特异性扩增： 针对N7基因的高度保守区域设计特异性引物和TaqMan探针。

荧光检测： 在PCR扩增过程中，荧光探针被切断，释放出荧光信号。仪器实时监测荧光信号的增加，从而判断样本中是否存在N7亚型流感病毒核酸。

3. 试剂盒组成

以常见的50次/盒规格为例，试剂盒通常包含以下组分：

组分名称 规格/体积 保存条件 功能说明

PCR反应液 含引物、探针、dNTPs -20℃避光 核心反应成分，通常已预混

酶混合液 含逆转录酶、Taq酶 -20℃ 催化逆转录和PCR扩增反应

阳性对照 1管 -20℃ 含N7基因片段的质粒或假病毒，用于验证试剂有效性

阴性对照 1管 4℃或-20℃ 无菌生理盐水或缓冲液，用于监控污染

ROX参比染料 (可选) -20℃ 部分试剂盒包含，用于校正仪器误差

 4. 样本要求与操作流程

第一步：样本采集

人医样本： 鼻咽拭子、口咽拭子、痰液、肺泡灌洗液。

兽医/环境样本： 喉气管拭子、泄殖腔拭子、病死禽的脏器组织（如脾、肺）、环境涂抹样。

保存： 采集后立即放入病毒采样管，2-8℃保存并尽快送检；长期保存需置于-70℃。

第二步：核酸提取 (关键步骤)

方法： 需使用配套的病毒RNA提取试剂盒（如磁珠法或柱提法）。

注意： RNA极易降解，操作过程应在冰上进行，并使用无RNase的耗材。

第三步：PCR反应体系配制

解冻： 将反应液和酶液在冰上解冻，振荡混匀并瞬时离心。

配制： 按说明书比例混合反应液、酶液和ROX（如需）。

分装： 将混合液分装至PCR反应管中。

第四步：加样

向反应管中加入提取好的RNA模板（通常为5-10 μL）。

设置阴性对照和阳性对照。

第五步：上机扩增

仪器： ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96等。

程序（参考）：

逆转录：42℃-50℃，10-15分钟。

预变性：95℃，3-5分钟。

PCR循环：95℃变性15秒，60℃退火/延伸30-45秒（采集荧光），共40-45个循环。

 5. 结果判读标准

有效实验判定：

阴性对照： 无Ct值，无扩增曲线。

阳性对照： Ct值 ≤ 35，扩增曲线呈典型的“S”型。

样本结果判定：

阳性 (+)： Ct值 ≤ 35，且扩增曲线呈明显的“S”型。表明样本中检测到N7亚型流感病毒核酸。

阴性 (-)： Ct值 > 38 或 无Ct值。表明样本中未检测到N7亚型流感病毒。

可疑 (灰区)： Ct值在 35-38之间。

建议：重新提取核酸或复测。若复测Ct值 < 38且曲线正常，则判为阳性；否则判为阴性。

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