Omono 河病毒检测试剂盒

Omono 河病毒检测试剂盒

 病毒背景与临床意义：

病毒特性：Omono 河病毒（ORV）是一种新发现的虫媒病毒，属于黄病毒科。它与乙型脑炎病毒（JEV）和西尼罗病毒（WNV）存在抗原交叉反应。

传播与分布：主要在日本秋田县小野川流域的蚊虫（库蚊）和野生啮齿动物中分离发现。

检测意义：由于其与乙脑病毒等具有相似性，且可能引起发热、神经系统症状等，准确区分ORV与其他黄病毒对于流行病学调查和精准治疗至关重要。

 检测原理与技术参数

目前市面上的Omono河病毒检测试剂盒主要采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术。

核心原理：

靶基因：针对ORV基因组中非结构蛋白NS5基因的保守区域设计特异性引物和TaqMan探针。

特异性：该设计能够特异性扩增Omono河病毒，避免与乙型脑炎病毒（JEV）、西尼罗病毒（WNV）等相近病毒发生交叉反应。

主要技术参数：

检测方法：一步法荧光RT-PCR（逆转录-聚合酶链式反应）。

出结果时间：约1.5 - 2小时。

 试剂盒组成与保存

包装规格：通常为48T或50T（次反应）。

主要组分：

PCR反应液：含dNTPs、Mg2、缓冲液。

酶混合液：含逆转录酶和Taq DNA聚合酶。

引物/探针混合液：特异性识别ORV。

阴性对照：无菌生理盐水或ddHO。

保存条件：-20℃避光保存，低温运输。避免反复冻融。

 操作流程详解

第一步：样本采集

样本类型：通常为咽拭子、血液或脑脊液（视具体研究目的而定）。

处理：将拭子放入含病毒保存液（VTM）的采样管中，充分震荡洗脱。

第二步：核酸提取

使用病毒RNA提取试剂盒（磁珠法或柱提法）提取样本中的总RNA。

注意：需设置空白提取对照，防止提取试剂污染。

第三步：PCR反应体系配置 (20 μL体系)

在冰浴上配制混合液：

2× qPCR Mix：10 μL

引物/探针：1 μL

酶混合液：0.4 - 1 μL

模板RNA：5 - 10 μL

无核酸酶水：补足至20 μL

第四步：上机扩增

仪器设置：荧光通道选择FAM（或根据探针标记调整）。

反应程序：

逆转录：50℃ (或42℃) 30分钟。

预变性：95℃ 5分钟。

循环扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 30-60秒 (采集荧光)，进行40-45个循环。

 结果判读标准

结果类型 判读标准 (Ct值) 扩增曲线特征

阳性 (+) Ct值 38 曲线呈典型的“S”型，且有明显的指数扩增期。

可疑 (±) 38 ≤ Ct值 40 荧光信号微弱，建议重新提取核酸或复核。

阴性 (-) Ct值 = 40 或 无 Ct 值 无扩增曲线，或曲线呈直线。

质控标准（必须满足，实验才有效）：

阴性质控品：Ct值 = 40（无扩增），无非特异性扩增。

阳性质控品：Ct值 ≤ 35，且扩增曲线正常。

 关键注意事项

防污染：PCR实验室必须严格分区。阳性对照含有高浓度病毒核酸，极易造成环境污染，操作时需格外小心，加样后立即丢弃吸头。

试剂处理：试剂使用前需充分震荡混匀并瞬时离心，避免管壁残留。避免反复冻融，以免酶活性下降。

适用范围：目前市面上的Omono河病毒检测试剂盒，大部分属于科研试剂（RUO），主要用于流行病学调查和基础研究，不可直接用于临床诊断，除非该产品已获得相应的医疗器械注册证。

假阴性风险：若样本采集时间过晚、病毒载量低于检测限，或RNA提取失败，均可能导致假阴性结果。

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