pFMV35S基因检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

pFMV35S基因检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

1. 检测原理：

该试剂盒基于 TaqMan 荧光探针法 的实时荧光定量 PCR（qPCR）技术。

靶标识别： 针对 FMV 35S 启动子的特异保守序列设计特异性引物和探针。

荧光信号： 反应体系中包含 FAM 荧光标记的探针。在 PCR 扩增过程中，随着目的基因片段的扩增，荧光探针被切断，释放出荧光信号。

实时监测： 仪器实时监测荧光信号的变化，通过扩增曲线和 Ct 值来判断样本中是否含有目标基因。

2. 检测目标与应用

目标基因： pFMV35S（玄参花叶病毒 35S 启动子）。

应用领域：

转基因筛查： 用于食品、饲料、农产品及其加工品中转基因成分的定性检测。

科研用途： 用于分子生物学研究中，检测构建的载体或转基因植株中是否含有该启动子元件。

特异性： 该试剂盒通常能特异性区分 FMV 35S 与同源性较高的 CaMV 35S（花椰菜花叶病毒 35S 启动子）。

3. 试剂盒组成（典型配置）

组分名称 规格/含量 作用

A-pFMV35S-1 (反应液) 1200μL × 1支 含 dNTPs、缓冲液、Mg2等

B-I (酶混合液) 55μL × 1支 含 HotStart Taq 酶、逆转录酶（如适用）、UNG酶

C-I (显色液/探针) 1200μL × 1支 含特异性引物和 FAM 标记的探针

PG-pFMV35S-I (阳性对照) 50μL × 1支 含目标片段的质粒或标准品，用于验证实验

NG-pFMV35S-I (阴性对照) 50μL × 1支 无菌水，用于监控污染

注：部分厂家可能将酶和反应液预混，具体以说明书为准。

 4. 操作流程简述

样本制备： 提取待测样品的基因组 DNA（建议使用配套的植物基因组 DNA 提取试剂盒）。

试剂配制（冰上操作）： 按照说明书比例（如 N+2 法，N 为样本数，+1 阴性对照，+1 阳性对照）混合 A、B、C 液，分装到 PCR 管中。

加样： 向分装好的反应管中分别加入 2-5μL 的模板 DNA（样本、阴性对照、阳性对照）。

上机扩增： 将 PCR 管放入荧光定量 PCR 仪中。

5. 反应程序与结果判读

推荐反应程序：

预变性： 95℃ 10 min（或按说明书设置）。

PCR 循环： 95℃ 15 sec → 60℃ (或 63℃) 45 sec（收集荧光），40-45 个循环。

结果判读标准：

阳性（+）：

扩增曲线呈典型的 S 型。

Ct 值 ≤ 36（或说明书设定的阈值）。

结论：样品中含有 pFMV35S 基因。

阴性（-）：

无 Ct 值，或 Ct 值 > 36（或无扩增曲线）。

结论：样品中不含有 pFMV35S 基因或含量低于检测限。

实验有效性：

阳性对照（PG）： 必须有明显扩增（Ct 值在预期范围内）。

阴性对照（NG）： 必须无扩增（无 Ct 值）。

若对照不符合要求，本次实验视为无效。

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