阿留申水貂病毒（AMDV）检测试剂盒（荧光PCR法）

阿留申水貂病毒（AMDV）检测试剂盒（荧光PCR法）

试剂简介：

1. 检测原理

该试剂盒基于 TaqMan 荧光探针法 实时定量 PCR（qPCR）技术。

靶标基因： 针对 AMDV 的 VP2 基因 保守区域设计特异性引物和探针。

反应机制： 在 PCR 扩增过程中，引物和特异性荧光探针（通常标记为 FAM 荧光素）与模板 DNA 结合。随着扩增的进行，Taq 酶切断探针，释放荧光信号。

定量/定性： 通过检测荧光信号的累积（Ct 值），可以判断样本中是否含有 AMDV（定性），并可根据标准曲线计算出病毒载量（定量）。

2. 产品特点与性能参数

性能指标 详细参数

检测靶标 阿留申水貂病毒（AMDV）VP2 基因

检测方法 荧光探针法（TaqMan）

灵敏度 极高，最低检测限可达 10～100 拷贝/μL，比普通 PCR 灵敏度高约 100 倍

特异性 仅特异性扩增 AMDV，与其他常见动物病毒（如犬细小病毒、猪细小病毒等）无交叉反应

重复性 批内和批间变异系数（CV）通常 2%，结果稳定可靠

适用样本 全血、脾脏、肾脏等组织匀浆液、血清等

3. 试剂盒组成（典型配置）

不同厂家的包装可能略有差异，但核心成分通常包括：

qPCR 反应液（Master Mix）： 含 dNTPs、反应缓冲液、Mg2 等。

特异性引物和探针混合液： 针对 AMDV VP2 基因设计。

DNA 聚合酶（Enzyme Mix）： 通常为热启动 Taq 酶。

阳性对照（Positive Control）： 含 AMDV 目标片段的质粒或假病毒，用于验证实验体系是否正常工作。

阴性对照（Negative Control）： 无菌水或缓冲液，用于监控污染。

内标（部分试剂盒包含）： 用于监控样本中是否存在 PCR 抑制物。

 4. 操作流程简述

样本处理： 采集水貂全血或组织样本，使用 DNA 提取试剂盒提取病毒基因组 DNA。

试剂准备： 在冰上解冻试剂，震荡混匀并瞬时离心。

体系配置： 按照说明书比例（通常为 20μL 或 25μL 体系）混合反应液、酶、引物探针及模板 DNA。

上机扩增： 将 PCR 管放入荧光定量 PCR 仪中。

推荐程序： 95℃ 预变性 5-10 min；然后进行 40-45 个循环（95℃ 变性 15 sec，60℃ 退火/延伸 30-60 sec，收集荧光）。

 5. 结果判读标准

阳性（+）：

扩增曲线呈典型的 S 型对数增长。

Ct 值 < 35（具体阈值请参考说明书，通常在 35-40 之间），且有明显的指数增长期。

阴性（-）：

无 Ct 值，或 Ct 值 ≥ 40（或设定的阈值），且扩增曲线为一条直线或仅有轻微波动。

可疑（±）：

Ct 值处于 35-40 之间。建议重新检测，若复检 Ct 值 < 40 且曲线正常，判为阳性；否则判为阴性。

实验有效性：

阳性对照必须有明显扩增（Ct ≤ 30），阴性对照无扩增，实验结果才视为有效。

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