埃可病毒 11 型 / 肠道病毒通用型检测试剂盒( 双重荧光 PCR 法 )

该试剂盒基于 实时荧光 RT-PCR（逆转录聚合酶链式反应） 技术，结合 TaqMan 探针法。

逆转录（RT）： 由于埃可病毒和肠道病毒属于 RNA 病毒，试剂盒首先利用逆转录酶将病毒 RNA 转换成互补 DNA（cDNA）。

PCR 扩增： 随后，针对特定基因序列进行扩增。

TaqMan 探针技术：

试剂盒中包含两对特异性引物和两根特异性探针。

肠道病毒通用型： 靶向肠道病毒属保守的 5'UTR 区域 或 VP1 区域，用于检测是否感染了肠道病毒（包括埃可病毒、柯萨奇病毒、EV71 等）。

埃可病毒 11 型： 靶向 E-11 特有的 VP1 保守区。

荧光信号： 探针两端分别标记有荧光报告基团（如 FAM、VIC/HEX）和荧光淬灭基团。在 PCR 延伸阶段，Taq 酶的 5'→3' 核酸外切酶活性会切断探针，使荧光报告基团与淬灭基团分离，从而发出荧光。荧光信号的强弱与扩增产物的数量成正比。

2. 检测目标与覆盖范围

该试剂盒采用双重检测体系，一次实验可同时获得两个结果：

检测通道 靶标基因 临床意义

FAM 通道 埃可病毒 11 型 (E-11) 特异性识别埃可病毒 11 型。该型别常引起婴幼儿急性发热、脑膜炎、皮疹等。

VIC/HEX 通道 肠道病毒通用型 (EV) 检测所有常见肠道病毒（包括柯萨奇病毒 A/B 组、埃可病毒其他型别、肠道病毒 71 型等）。

内参通道 (ROX) 人工合成内标 监控样本采集、核酸提取和 PCR 扩增全过程，防止假阴性（如采样不合格或抑制物干扰）。

3. 产品规格与性能参数

包装规格： 通常为 48 人份/盒 或 50 人份/盒。

检测限（灵敏度）： 最低检测限通常可达 1.0 × 103 copies/mL 或 500 copies/mL，具有极高的灵敏度，能检出微量病毒感染。

特异性： 与呼吸道合胞病毒、流感病毒、腺病毒等其他常见呼吸道病原体无交叉反应。

储存条件： -20℃ ± 5℃ 避光保存，有效期通常为 12 个月。运输需低温冷链。

 4. 操作流程简述

样本采集： 使用无菌咽拭子、粪便或脑脊液等样本。

核酸提取： 使用配套的病毒 DNA/RNA 提取试剂盒，从样本中提取核酸。

反应体系配置： 将提取的核酸、PCR 反应液、酶混合物按比例加入 PCR 管中。

上机扩增： 放入实时荧光 PCR 仪（如 ABI 7500、上海宏石等），设置反应程序（通常包括逆转录、预变性、扩增循环）。

典型程序： 50℃ 15min (逆转录) → 95℃ 5min (预变性) → 95℃ 15sec → 55-60℃ 30-45sec (40-45个循环)。

 5. 结果判读标准

结果判定主要依据扩增曲线和 Ct 值（循环阈值）。

阳性（+）： Ct 值 < 38，且扩增曲线呈典型的 S 型，有明显的指数增长期。

FAM 阳性： 提示感染埃可病毒 11 型。

VIC 阳性： 提示感染肠道病毒（非 11 型或其他混合感染）。

可疑（±）： Ct 值在 38 ～ 40 之间。建议重新检测，若仍在此范围且有扩增曲线，可判为阳性。

阴性（-）： Ct 值 ≥ 40 或无 Ct 值，且无典型扩增曲线。

无效： 阴性质控品出现扩增，或阳性质控品未扩增，或内参未扩增（提示提取失败），本次实验无效，需重做。

 6. 注意事项与局限性

防污染： PCR 检测极其灵敏，操作过程中必须严格分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯的枪头，防止气溶胶污染导致假阳性。

样本质量： 结果准确性高度依赖样本采集质量。采样部位不准确或保存液失效会导致假阴性。

临床诊断： 本试剂盒仅用于临床辅助诊断。检测结果需结合患者的临床症状、流行病学史及其他检查结果（如血清学抗体检测、病毒培养）综合判断。

适用范围： 仅用于体外诊断，不可用于治疗监测或药物疗效评价。