巴尔通体检测试剂盒(荧光 PCR 法) 新品

巴尔通体检测试剂盒(荧光 PCR 法)

一、检测原理：

荧光PCR法基于TaqMan探针技术，通过特异性引物和荧光标记探针扩增巴尔通体的靶基因（如**16S rRNA、gltA（柠檬酸合成酶基因）、ITS（内转录间隔区）**等），实时监测荧光信号，实现定量或定性检测。

关键组分

引物探针：针对巴尔通体保守序列设计，如：

B. henselae（汉赛巴尔通体）

B. quintana（五日热巴尔通体）

B. bacilliformis（杆菌状巴尔通体）

酶系统：热启动Taq DNA聚合酶+逆转录酶（若检测RNA）

内参对照：监测样本提取及扩增效率（如人β-actin）

二、适用样本类型

样本类型 适用性 采集要求

全血（EDTA抗凝） 最佳（尤其慢性感染） 2-5 mL，4℃保存（<24h）

组织活检（淋巴结、心内膜） 确诊感染部位 无菌采集，-80℃冻存

脑脊液（CSF） 神经型巴尔通体病 ≥1 mL，避免反复冻融

血清/血浆 抗体检测更优，PCR灵敏度较低 分离后-20℃保存

三、操作流程

1. 核酸提取

推荐磁珠法/柱提法（如QIAamp DNA Mini Kit）

避免使用肝素抗凝管（抑制PCR）

2. PCR反应体系配制

组分 体积（μL） 作用

2×PCR Mix 10 提供dNTPs、Mg2、缓冲液

引物（10μM） 0.5-1.0 特异性扩增

探针（5μM） 0.5 荧光信号释放

模板DNA 2-5 检测靶序列

ddHO 补至20 调整体积

3. 扩增程序

步骤 温度 时间 循环数

预变性 95℃ 3 min 1

变性 95℃ 15 sec 40

退火/延伸 60℃ 1 min

4. 结果判读

阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈典型S型

可疑：Ct值35-40，建议重复检测

阴性：无扩增信号

四、性能参数

指标 参数

灵敏度 10-100 拷贝/μL

特异性 >98%（无交叉反应）

检测限（LOD） 50-100 CFU/mL

检测时间 2-3小时

五、临床意义

早期诊断：比血清学检测（如IFA、ELISA）更早发现感染

鉴别诊断：区分巴尔通体与其他发热性疾病（如Q热、莱姆病）

疗效监测：抗生素治疗后PCR转阴提示治疗有效

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