阪崎肠杆菌检测试剂盒

阪崎肠杆菌检测试剂盒

试剂简介：

一、检测目标与临床意义

1.1 病原体特征

分类学：肠杆菌科（Enterobacteriaceae），克罗诺杆菌属（Cronobacter），原称阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）

主要血清型：O1、O2为婴幼儿感染主要型别

致病性：

新生儿脑膜炎、坏死性小肠结肠炎（病死率40-80%）

主要污染源：婴儿配方奶粉（PIF）

1.2 技术优势

三重检测体系：

FAM：ompA基因（属特异性标记）

HEX：zpx基因（毒力因子，编码锌金属蛋白酶）

CY5：内标（扩增控制）

灵敏度：1 CFU/10g奶粉（经8h增菌后）

二、试剂盒组成与样本处理

2.1 核心组分（48测试/盒）

组分 技术特性

增菌培养基 改良mLST-Van（含万古霉素，抑制杂菌）

核酸提取试剂 磁珠法快速提取（含革兰阴性菌破壁酶）

PCR预混液 含抗奶粉基质抑制因子（适配脂肪含量≤28%的样本）

引物探针组 三通道设计

2.2 样本前处理

奶粉样本：

无菌取10g+90mL缓冲蛋白胨水，37℃预增菌4h

转接1mL至mLST-Van，44℃选择性增菌8h

环境拭子：

直接浸泡于1mL增菌液，无需稀释

三、标准化检测流程

3.1 操作步骤（全程约12小时）

核酸提取：

取1mL增菌液，12,000g离心2分钟

磁珠法提取（20μL洗脱体积）

qPCR扩增：

反应体系（25μL）：

预混液12.5μL + 探针混合液2μL + 模板5μL + 无核酸酶水5.5μL

循环程序：

95℃ 5min → 45×[95℃ 15sec → 60℃ 45sec]（三通道采集）

3.2 结果判读标准

通道 Ct值范围 判定依据

FAM(ompA) ≤35 阪崎肠杆菌属阳性

HEX(zpx) ≤35 产毒株确认

CY5(内标) 25-30 检测系统有效

四、质量控制与法规要求

4.1 质控要点

过程控制：每批添加Cronobacter ATCC 29544株（Ct值需≤28）

交叉反应：与沙门氏菌、大肠杆菌无扩增（经ISO 22964验证）

4.2 法规符合性

国际标准：ISO 22964:2025《奶粉中阪崎肠杆菌检测》

中国国标：GB 4789.40-2025《食品安全国家标准 克罗诺杆菌检验》

五、应用与注意事项

5.1 典型应用场景

乳品企业：原料奶粉入厂筛查

新生儿ICU：疑似感染源追溯

5.2 生物安全

阳性样本：121℃高压灭菌15分钟

变异监测：

关注ompA基因新变异（如2024年O3亚型）

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