阪崎杆菌检测试剂盒 新品

阪崎杆菌检测试剂盒

试剂简介：

检测目标：特异性检测阪崎肠杆菌（Cronobacter sakazakii），一种婴幼儿配方奶粉中的高风险病原体，可导致新生儿脑膜炎、败血症等严重感染。

方法原理：基于荧光定量PCR，靶向阪崎肠杆菌的保守基因（如ompA或esaS），通过FAM通道检测，搭配内参基因（如16S rRNA，HEX通道）监控提取效率。

适用样本：婴幼儿奶粉（首选）、加工环境拭子、水样、食品原料（如乳清蛋白粉）。

2. 检测流程

样本前处理

奶粉样本：10 g奶粉加90 mL缓冲蛋白胨水（BPW），37℃预增菌6h。

环境拭子：置于EE肉汤中增菌18-24h。

DNA提取

磁珠法提取（如QIAamp DNA Mini Kit），需去除乳制品中钙离子干扰。

PCR扩增

反应体系：

引物探针：esaS（FAM）、内参（HEX）。

循环程序：95℃ 3min →（95℃ 15s → 60℃ 45s）×45循环。

结果判读

阳性：Ct≤35（FAM），且内参Ct≤30。

可疑：35<Ct<38，建议复测或结合培养法验证。

3. 性能参数

指标 参数要求

灵敏度 ≤10 CFU/25g奶粉（经增菌后）

特异性 不与大肠杆菌、沙门氏菌交叉

检出限 100%检出率（1 CFU/10g奶粉）

抗干扰性 耐受奶粉中脂肪与蛋白质

4. 注意事项

假阴性控制：

奶粉中可能含PCR抑制物（如乳铁蛋白），建议稀释样本或添加抑制剂去除剂。

增菌步骤不可省略（低载量样本需富集）。

生物安全：操作需在BSL-2实验室进行，避免气溶胶污染。

质控要求：每批次含阴性对照（无菌BPW）、阳性对照（阪崎肠杆菌ATCC 29544）。

5. 应用场景

食品安全：婴幼儿奶粉生产链（原料→成品）的全程监测。

市场监管：进口奶粉的合规性筛查（如中国GB 10765标准）。

暴发调查：新生儿感染病例的病原溯源。

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