包虫病（hydatid disease)检测试剂盒（荧光PCR法）

包虫病（hydatid disease)检测试剂盒（荧光PCR法）

试剂简介：

检测目标

病原体：细粒棘球绦虫（Echinococcus granulosus）和多房棘球绦虫（E. multilocularis）的DNA。

靶基因：

线粒体细胞色素b基因（cytb）（属特异性检测）

Em18基因（多房棘球蚴特异性标志）

覆盖类型：囊型包虫病（CE）和泡型包虫病（AE）。

方法原理

双重荧光PCR：

cytb-FAM探针（通用检测） + Em18-HEX探针（AE分型），内标（Cy5）监控提取与扩增。

灵敏度达0.1 pg/μL DNA，较ELISA法（交叉反应率高）特异性提升＞95%。

适用样本

临床：患者血清（游离DNA）、穿刺液（囊肿内容物）、组织活检

动物宿主：犬粪便（终宿主筛查）、中间宿主（羊/鼠）肝脏病变组织

二、试剂盒组分与操作流程

1. 核心组分

组分 功能说明

PCR预混液 含抗抑制剂Taq酶、dNTPs（优化抗多糖/蛋白干扰）

探针引物混合液 cytb-FAM/Em18-HEX探针，内标（人/动物β-actin基因，Cy5标记）

阳性对照 灭活细粒棘球蚴DNA（WHO 10/2025标准品）

核酸提取试剂 磁珠法（含胶原酶预处理模块，适配囊肿壁组织）

2. 操作步骤（以囊肿穿刺液为例）

前处理：

穿刺液离心（3,000g, 10min），沉淀用裂解液+蛋白酶K消化。

PCR扩增（30μL体系）：

95℃ 5min → [95℃ 15s → 60℃ 45s]×40 cycles（FAM/HEX/Cy5同步采集）

三、性能与结果解读

1. 关键参数

指标 性能标准

灵敏度 1拷贝/反应（纯DNA）

特异性 不与带绦虫、曼氏迭宫绦虫交叉

抗干扰性 耐受20%胆汁或10%囊肿液杂质

2. 结果判读

CE阳性：cytb（FAM）Ct≤35，Em18（HEX）无信号。

AE阳性：cytb（FAM）Ct≤35 + Em18（HEX）Ct≤35。

无效检测：内标（Cy5）无扩增 → 需复查提取步骤。

四、注意事项

采样要求

穿刺液需避免胆汁污染（可能抑制PCR），血清样本建议采集3mL以上。

生物安全

泡球蚴样本含活寄生虫，需BSL-2实验室操作，穿刺针头需高压灭菌。

局限性

不能区分活动性感染与既往感染（需结合IgG抗体检测）。

五、应用场景

临床诊断：

肝脏占位病变的病原鉴别（肝癌/包虫病）。

流行病学调查：

牧区犬粪筛查（细粒棘球绦虫终宿主控制）。

治疗监测：

阿苯达唑治疗后的DNA载量动态评估。

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