鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗菌基因(OXA23/OXA24)检测试剂盒

检测目标

靶基因：

OXA-23（主要流行碳青霉烯酶基因，介导鲍曼不动杆菌对亚胺培南/美罗培南耐药）

OXA-24/40（常见于西班牙克隆株，导致泛耐药表型）

辅助标记：同步检测blaNDM-1（可选模块，鉴别共携带菌株）。

方法原理

多重荧光PCR：

OXA-23-FAM探针 + OXA-24-HEX探针，内标（Cy5标记16S rRNA基因）监控提取质量。

采用抗抑制剂聚合酶，适配痰液、伤口分泌物等高黏度样本。

适用样本

临床分离株（血平板纯培养物）、支气管肺泡灌洗液（BALF）、脑脊液（CRAB脑膜炎）

环境样本：呼吸机管路表面拭子、ICU物体表面

二、试剂盒组分与操作流程

1. 核心组分

组分 功能说明

PCR预混液 含热启动Taq酶、dUTP/UNG系统（防气溶胶污染）

探针引物混合液 OXA-23-FAM/OXA-24-HEX探针，内标引物（Cy5）

阳性对照 灭活OXA-23/OXA-24双阳性菌株（ATCC BAA-1605）

快速裂解液 含溶菌酶和蛋白酶K，直接裂解细菌（免DNA提取，15分钟出结果）

2. 操作步骤（以痰液样本为例）

样本处理：

痰液+裂解液涡旋震荡，95℃加热5分钟灭活。

PCR扩增（25μL体系）：

95℃ 3min → [95℃ 10s → 60℃ 30s]×40 cycles（FAM/HEX/Cy5同步采集）

三、性能与结果解读

1. 关键参数

指标 性能标准

灵敏度 1 CFU/反应（纯培养物）

特异性 不与OXA-48、KPC等碳青霉烯酶交叉

抗干扰性 耐受20%黏液或5%血液

2. 结果判读

耐药基因阳性：

OXA-23（FAM）Ct≤35 → 提示亚胺培南耐药风险（MIC≥16 μg/mL）。

OXA-24（HEX）Ct≤35 → 提示美罗培南高耐药性（MIC≥32 μg/mL）。

无效检测：内标（Cy5）无信号 → 需复查采样或提取步骤。

四、注意事项

采样时效性

CRAB定植患者需连续3天采样（提高检出率）。

生物安全

泛耐药鲍曼不动杆菌（XDRAB）需BSL-2实验室操作，废弃物需高压灭菌。

局限性

不能区分染色体或质粒携带的OXA基因（需Southern blot验证）。

五、应用场景

临床诊疗：

指导碳青霉烯类抗生素使用（如OXA-23阳性时避免亚胺培南）。

院感暴发调查：

追踪克隆传播链（如ST2型OXA-23流行株）。

抗菌药管理（AMS）：

多粘菌素/替加环素使用前的快速耐药筛查。