鲍鱼立克次氏体病（XC）检测试剂盒（荧光PCR法） 新品

鲍鱼立克次氏体病（XC）检测试剂盒（荧光PCR法）

试剂简介：

1.1 病原体特征

分类学：α-变形菌纲，立克次氏体科（Rickettsiaceae），专性胞内寄生

靶基因选择：

gltA基因（柠檬酸合成酶，属保守标记）

sca4基因（外膜蛋白，种特异性）

宿主范围：

主要感染皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）

通过水体传播，致死率可达80%（幼鲍阶段）

1.2 技术优势

四重检测体系：

FAM：gltA（属水平检测）

HEX：sca4（XC特异性）

CY5：鲍鱼EF-1α内参

ROX：过程控制（噬菌体phiR1L37）

灵敏度：10拷贝/μL（比传统PCR高100倍）

二、试剂盒组成与样本处理

2.1 核心组分（48测试/盒）

组分 技术特性

核酸提取试剂 含溶菌酶+CTAB的革兰阴性菌破壁系统（适配鲍鱼粘液样本）

PCR预混液 含抗多糖抑制因子（针对鲍鱼软组织高糖特性）

引物探针组 四通道设计（兼容ABI 7500/LightCycler 480等机型）

质控品 灭活XC-HN2023株（阳性）、SPF鲍肝胰腺提取物（阴性）

2.2 样本采集规范

最佳样本：

濒死鲍：肝胰腺（病毒载量最高）

无症状鲍：鳃丝或足部粘液

保存运输：

RNA保护液（如RNAlater）中4℃保存≤48h

远程运输需液氮速冻

三、标准化检测流程

3.1 操作步骤（全程约3.5小时）

核酸提取：

组织匀浆：50mg肝胰腺+1mL裂解液（含β-巯基乙醇）

磁珠法纯化（30μL洗脱体积）

qPCR扩增：

反应体系（25μL）：

预混液12.5μL + 探针混合液2μL + 模板5μL + 无核酸酶水5.5μL

循环程序：

95℃ 5min → 45×[95℃ 15sec → 60℃ 45sec]（四通道采集）

3.2 结果判读标准

通道 Ct值范围 判定依据

FAM(gltA) ≤35 立克次氏体属感染

HEX(sca4) ≤35 XC特异性感染确诊

CY5(内参) 22-28 样本质量合格

ROX(过程) 30±2 提取效率正常

四、质量控制与技术创新

4.1 质控要点

抑制物监控：ROX通道Ct值>35需稀释复测

交叉验证：

阳性样本建议吉姆萨染色（胞内紫色包涵体）

临界值样本需测序确认（sca4基因）

4.2 2025年升级

微流控快检版：

集成提取与检测（1.5小时完成）

适配养殖场现场使用

数字PCR定量：

科研版可检测102%的隐性感染

五、应用与生物安全

5.1 典型场景

育苗场监测：

亲鲍检疫（鳃拭子筛查）

饵料生物风险管控

流行病学研究：

不同地理株sca4基因变异分析

5.2 注意事项

灭活处理：阳性样本需121℃高压30分钟

引物更新：

每年比对GenBank新毒株（如2024年XC-JZ变异株）

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