鲍鱼疱疹病毒（AbHV）检测试剂盒(荧光PCR法)

检测目标：特异性检测鲍鱼疱疹病毒（Abalone Herpesvirus, AbHV），该病毒可引致鲍鱼大规模死亡（如鲍鱼病毒性死亡症），主要感染神经组织和结缔组织。

方法原理：基于荧光定量PCR，靶向AbHV的**DNA聚合酶基因（ORF49）**保守区，通过FAM通道检测，搭配内参基因（如鲍鱼EF-1α，HEX通道）监控样本质量。

适用样本：鲍鱼鳃组织（首选）、血淋巴、幼虫匀浆液、养殖水体（需滤膜浓缩）。

2. 检测流程

样本处理

组织样本：取10 mg鳃组织液氮研磨，加入裂解液（含蛋白酶K）消化。

水体样本：0.45 μm滤膜过滤，PBS洗脱病毒颗粒。

DNA提取

推荐磁珠法（如DNeasy Blood & Tissue Kit），避免多糖抑制。

PCR扩增

反应体系：

引物探针：ORF49-F/R（FAM）、内参（HEX）。

循环程序：95℃ 3min →（95℃ 15s → 60℃ 45s）×45循环。

结果判读

阳性：Ct≤35（FAM），且内参Ct≤30。

可疑：35<Ct<38，建议重复检测或测序确认。

3. 性能参数

指标 参数要求

灵敏度 ≤10 copies/反应

特异性 不与OsHV-1（牡蛎疱疹病毒）交叉

检出限 10^2 copies/mg组织

抗干扰性 耐受10%鲍鱼黏液或海水盐分

4. 注意事项

假阴性风险：

潜伏感染期病毒载量低，建议检测多组织（如神经节+鳃）。

水体样本需超滤浓缩（100倍）以提高灵敏度。

生物安全：操作需在BSL-2实验室进行，避免交叉污染。

质控要求：每批次含阴性对照（健康鲍鱼DNA）、阳性对照（AbHV质粒）。

5. 应用场景

养殖场防控：

种鲍检疫（垂直传播阻断）。

发病鲍鱼病原确诊（如急性死亡伴足肌萎缩）。

进出口监管：活鲍运输前的病毒筛查。