鼻疽伯克霍尔德菌(BM)检测试剂盒(荧光PCR法)

鼻疽伯克霍尔德菌(BM)检测试剂盒(荧光PCR法)

试剂简介：

鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia mallei，BM）是高致病性生物恐怖病原体（CDC Tier 1病原），可引致人畜共患的鼻疽病。本试剂盒基于实时荧光PCR技术，靶向BM特异性基因BCAM0041（编码III型分泌系统蛋白）和fliC（鞭毛蛋白基因），具有以下核心价值：

生物防御：快速识别疑似生物恐怖袭击或实验室暴露事件

临床诊断：鉴别类鼻疽（B. pseudomallei）与鼻疽感染

兽医检疫：马科动物（马、驴）的强制性筛查

环境监测：疫源地土壤、水体病原追踪

二、技术原理与生物安全设计

1. 双重检测体系

靶标基因 荧光通道 鉴别意义

BCAM0041 FAM BM特异性标志（灵敏度100%）

fliC HEX 区分BM与类鼻疽菌

内参（人GAPDH） ROX 临床样本质控

2. 生物安全创新

灭活型裂解液：含4%甲醛，使BM失活同时保留RNA完整性（符合BSL-3要求）

防泄漏设计：冻干试剂预装八联管，减少开盖操作

假阳性控制：内置人工内标监控交叉污染

三、试剂盒组分与储存

1. 核心组分

灭活裂解液：含核酸稳定剂（室温保存）

冻干PCR微球：预装引物探针/酶混合物（含UNG防污染系统）

阳性对照：灭活BM DNA片段（γ射线辐照处理）

阴性对照：无核酸水（DEPC处理）

提取控制品：人工RNA片段

2. 储存与运输

未开封：4℃保存12个月（避免光照）

复溶后：立即使用（不可保存）

运输：常温（需生物安全资质承运商）

四、样本采集与灭活处理

1. 适用样本类型

样本类型 生物安全等级 前处理要点

脓液/组织 BSL-3 1:10稀释后沸水浴10分钟

血液 BSL-2 EDTA抗凝，直接加入裂解液

环境拭子 BSL-2 悬浮于1mL含0.5% Tween-80 PBS

2. 关键注意事项

人员防护：N95口罩+护目镜+双层手套（处理临床样本）

灭活验证：所有样本需经培养验证无活菌（接种血平板48小时）

提取控制：每批加入10拷贝人工RNA监控效率

五、检测操作流程

1. 反应体系（20μL）

组分 体积 终浓度

复溶冻干微球 1粒/管 —

灭活样本裂解液 5μL —

无核酸酶水 补至20μL —

2. 扩增程序

UNG处理：37℃ 2分钟（降解污染物）

预变性：95℃ 1分钟

45循环：

95℃ 5秒 → 60℃ 30秒（采集FAM/HEX信号）

3. 质控标准

阳性对照：FAM Ct≤25，HEX Ct≤28

阴性对照：无扩增

内参异常：GAPDH Ct>30需重提核酸

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