丙型流感病毒检测试剂盒

检测目标

靶基因：

HEF基因（血凝素-酯酶融合蛋白，型特异性标志）

NP基因（核蛋白，辅助分型）

覆盖亚型：C/Yamagata和C/Victoria谱系（基于HEF氨基酸变异位点）。

技术原理

双重荧光RT-PCR：

FAM标记HEF基因（病毒分型） + HEX标记NP基因（载量定量），内标（Cy5）监控全程。

灵敏度达5拷贝/μL，较传统MDCK细胞培养法（7天）提速至2小时。

适用样本

临床：鼻咽拭子（病毒载量最高）、支气管肺泡灌洗液（重症肺炎患者）

环境：气溶胶采样膜（需裂解液预处理）

二、试剂盒组分与操作

1. 核心组分

组分 功能说明

RT-PCR预混液 含抗抑制剂逆转录酶、dUTP/UNG防污染系统（适配黏液样本）

探针引物组 HEF-FAM/NP-HEX探针，内标（人RNase P基因-Cy5）

阳性对照 灭活C/Yamagata-2025株（ATCC VR-1812）

核酸释放剂 含离液盐和蛋白酶K（拭子样本直接裂解，免提取）

2. 操作流程（以鼻咽拭子为例）

样本处理：

拭子头浸入200μL释放剂，涡旋10秒，室温裂解5分钟。

PCR扩增：

50℃ 15min（RT）→ 95℃ 3min → [95℃ 10s → 60℃ 30s]×45 cycles

结果判读：

HEF（FAM）Ct≤35 + NP（HEX）Ct≤35 → 阳性。

三、性能与质控

1. 关键参数

指标 性能标准

灵敏度 100%检出率（≥50拷贝/mL）

特异性 不与甲/乙型流感、RSV交叉反应

抗干扰性 耐受20%鼻腔分泌物或10%血液

2. 质控要求

每批次需包含：

1个阳性对照（Ct值偏差≤1.5）

1个阴性对照（无扩增）

1个内标孔（Cy5 Ct≤30）

四、注意事项

采样时效性

发病48小时内鼻咽拭子检出率＞95%，儿童样本建议深部采集。

局限性

不能区分活病毒与非感染性RNA（需结合抗原检测）。

生物安全

丙型流感病毒属BSL-2病原体，废弃物需121℃高压处理。

五、应用场景

临床诊断：

儿童急性呼吸道感染（发病率＜5%，但易合并中耳炎）。

流行病学监测：

养老院/学校聚集性疫情溯源。

疫苗研发：

HEF蛋白变异位点追踪（疫苗株匹配度评估）。