淋巴瘤细胞+LUC+eGFP;MV4-11-LUC-eGFP-puro 新品

                                                          淋巴瘤细胞+LUC+eGFP;MV4-11-LUC-eGFP-puro
产品信息：

该细胞系是 MV4-11 细胞的荧光改造株，稳定表达荧光素酶（LUC）和增强型绿色荧光蛋白（eGFP），并带有嘌呤霉素（Puromycin）抗性。它主要用于活体成像（IVIS）、细胞示踪及高通量药物筛选实验。

细胞基本信息

亲本来源：MV4-11 (人髓性单核细胞白血病细胞)

种属来源：人（Homo sapiens）

供体信息：10岁男性，急性髓系白血病（双表型B系髓单核细胞白血病）

标记基因：

LUC：荧光素酶，用于生物发光成像（需底物荧光素）。

eGFP：增强型绿色荧光蛋白，可直接在荧光显微镜下观察（Ex/Em ～488/507 nm）。

Puro：嘌呤霉素抗性基因，用于筛选和维持质粒。

培养基：IMDM + 10% FBS

细胞特性与应用

特征维度  详细描述

背景简介  通过慢病毒感染亲本 MV4-11 细胞，筛选得到的稳定双标记细胞系。

荧光特性  细胞膜/胞浆呈绿色荧光（eGFP），细胞核通常不发荧光；活体注射后可通过尾静脉注射荧光素底物进行 LUC 成像。

抗性维持  培养基中通常需要添加 Puromycin (嘌呤霉素) 以维持荧光标记的稳定表达。

主要应用  1. 活体示踪（肿瘤移植瘤模型、转移模型）。

药物体内/体外杀伤活性检测（通过荧光强度或生物发光强度评估细胞活力）。

推荐培养体系

基础培养基：IMDM (Iscove's Modified Dulbecco's Medium)

血清添加：10% 胎牛血清 (FBS)（建议使用优质进口血清，该细胞对血清质量较敏感）

双抗添加：1% 青霉素-链霉素 (P/S)

筛选压力：Puromycin (嘌呤霉素)（通常添加浓度为 1-2 μg/mL，具体请参考构建说明书，用于维持质粒不丢失）

培养环境：

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：维持培养箱内湿度 >90%。

详细培养操作指南

1. 细胞复苏 (Thawing)

预热：37℃ 水浴锅预热完全培养基。

解冻：迅速将冻存管置于 37℃ 水浴中，1-2 分钟内快速摇晃融化。

转移：酒精消毒后转入超净台，将细胞悬液缓慢加入含 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中。

离心：1000 rpm (约 250g) 离心 3-5 分钟。

接种：弃上清，用完全培养基重悬，接种至 T25 培养瓶中，放入培养箱静置培养。

细胞传代 (Passage)

MV4-11-LUC-eGFP-puro 为悬浮细胞。

观察：当细胞密度达到 0.8-1.0 × 10 cells/mL 时进行传代（该细胞有密度依赖性，密度过低生长缓慢）。

收集：直接将培养瓶中的细胞悬液转移至离心管中。

清洗：1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清，用 PBS 重悬洗涤一次（可选，视培养基颜色而定）。

重悬与分瓶：

方法一（直接分瓶）：轻轻吹打混匀后，将细胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例直接分装到新的培养瓶中，补充新鲜完全培养基继续培养。

方法二（离心换液）：离心后弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，调整细胞密度至 3-5 × 10 cells/mL 接种。

注意事项：该细胞对离心力较敏感，常规扩增时若细胞状态良好，可直接分瓶不离心；若碎片较多，建议低速离心去除碎片。

细胞冻存 (Freezing)

状态选择：选择对数生长期、活力好、形态佳的细胞。

计数：消化收集细胞（若贴壁不牢可直接收集），离心后重悬。

冻存液：推荐使用 90% 完全培养基 + 10% DMSO，或专用无血清冻存液。

密度：调整细胞密度至  cells/mL。

程序降温：分装入冻存管，使用程序降温盒（-80℃ 过夜），次日转入液氮罐长期保存。

关键注意事项

悬浮生长：该细胞在培养瓶中呈悬浮状态，呈单个细胞或小团簇状。不要使用胰酶消化（除非有特殊贴壁诱导实验），正常传代只需吹打混匀即可。

密度依赖：MV4-11 细胞系具有一定的密度依赖性，传代后初始密度不宜过低（建议不低于

否则会导致生长迟缓或死亡。

荧光观察：在普通倒置显微镜下，eGFP 标记的细胞在蓝光激发下会发出明显的绿色荧光，可用于快速判断细胞存活状态和标记稳定性。

抗性维持：为了防止 LUC 和 eGFP 基因丢失，建议在培养基中持续添加 Puromycin。若用于动物实验接种，需确认动物体内无抗生素干扰。

运输状态：若收到的是悬浮细胞，直接离心换液即可；若收到冻存管，按复苏步骤操作。

公司正在出售的产品：

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注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。