人肾上皮细胞系;Lentix293

                                                          人肾上皮细胞系;Lentix293
产品信息：

1. 细胞基本特性与背景

来源背景： 转染了腺病毒5型（Ad5）DNA的永生化人胚肾细胞。

细胞类型： 上皮细胞样（Epithelial）。

生长特性： 贴壁生长（部分衍生株如293F也可适应悬浮培养）。

关键特性：

高转染效率： 极易导入外源基因，是质粒转染的首选。

病毒包装能力： 广泛用于慢病毒、腺病毒、腺相关病毒（AAV）的包装与生产。

表达SV40 Large T抗原： （针对293T/293FT等株系）这使得含有SV40复制起点的质粒（如pcDNA3.1）能在其中高效复制，进一步提高蛋白表达量。

培养条件与完全培养基配置

Lentix 293细胞的培养条件相对标准，通常使用高糖DMEM培养基。

基础培养基： DMEM（高糖，High Glucose）。

添加成分：

胎牛血清 (FBS)： 10%（建议使用优质胎牛血清，部分实验可使用15%以促进生长）。

双抗 (Penicillin-Streptomycin)： 1%（可选，但在病毒包装时建议添加）。

可选补充： 1× GlutaMAX（L-谷氨酰胺）或 1 mM 丙酮酸钠（部分实验室常规添加）。

培养环境：

温度： 37℃。

气相： 5% CO，95% 空气。

湿度： 饱和湿度。

详细培养操作指南

细胞复苏

快速解冻： 将冻存管从液氮中取出，迅速放入 37℃水浴 中，轻轻摇晃，使其在 1 分钟内完全融化。

稀释离心： 用酒精消毒管壁，将细胞悬液缓慢加入含 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中混匀。1000 rpm 离心 3-5 分钟。

重悬接种： 弃去上清，加入适量完全培养基重悬细胞，接种到 T25 培养瓶中。

静置培养： 次日观察细胞贴壁情况，建议更换新鲜培养基以去除残留的 DMSO。

细胞传代（当细胞密度达 80%-90% 时）

注意：293系列细胞贴壁较弱，消化时请温柔操作。

弃液洗涤： 弃去旧培养基，用不含钙镁离子的 PBS 润洗细胞 1 次（可选，去除死细胞）。

消化： 加入 0.25% 胰蛋白酶（Trypsin-EDTA，约 1-2 mL），放入 37℃ 培养箱消化 1-2 分钟。

观察要点： 显微镜下观察，当细胞间隙变大、细胞变圆但尚未漂浮时，即可终止消化。

终止消化： 加入含血清的培养基终止消化。

分瓶： 由于293细胞贴壁不牢，通常不需要离心。直接将细胞悬液按 1:3 至 1:6 的比例分装到新的培养瓶中，补充新鲜培养基即可。

细胞冻存

收集： 按传代步骤收集处于对数生长期的细胞。

冻存液： 推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或者专用的无血清冻存液。

程序降温： 将冻存管放入程序降温盒，置于 -80℃冰箱 过夜，第二天转入 液氮罐 长期保存。

关键注意事项（必读）

贴壁较弱：

293细胞（特别是293T）贴壁能力较差。传代时不要过度消化，吹打时要轻柔，否则细胞容易成团且难以贴壁。

生长速度快：

该细胞倍增时间短（约24小时），生长迅速，需密切观察，防止细胞过密导致脱落。

G418筛选禁忌：

如果你使用的是 293T 细胞，它通常对 G418（遗传霉素） 具有抗性（因为表达了SV40 T抗原）。因此，在进行质粒转染筛选时，请勿使用G418作为筛选抗生素，应改用嘌呤霉素（Puromycin）或潮霉素（Hygromycin）。

病毒包装应用：

作为“Lentix”细胞，它主要用于慢病毒包装。转染时建议使用高纯度质粒和高效转染试剂（如PEI或脂质体），并在转染后48-72小时收集病毒上清。

总结

Lentix 293 是分子生物学和病毒学研究的基石。培养它的核心在于控制消化时间（因为贴壁弱）和及时传代（因为长得快）。只要掌握好这两点，它就是最听话、产量最高的“蛋白/病毒工厂”。

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注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。