人APP基因转染CHO细胞株;7WD10 新品

                                                          人APP基因转染CHO细胞株;7WD10
产品信息：

这是一份关于人APP基因转染CHO细胞株（7WD10）的详细说明、细胞特性及标准培养操作指南。

7WD10 细胞是一种经过基因工程改造的 CHO（中国仓鼠卵巢）细胞系，稳定转染了人源的 APP（淀粉样前体蛋白） 基因。它常用于阿尔茨海默病（AD）相关的机制研究，特别是 Aβ（β-淀粉样蛋白）的产生、代谢及药物筛选。

细胞基本信息

背景来源：CHO 细胞（中国仓鼠卵巢细胞）

基因修饰：稳定转染人 APP 基因（通常为野生型或特定突变型，具体需参考说明书）。

表达产物：表达人 APP 蛋白，进而分泌 Aβ 蛋白。

生长特性：贴壁生长

筛选标记：通常含有 G418（新霉素） 抗性基因。

细胞特性与应用

特征维度  详细描述

背景简介  采用脂质体转染法，将人 APP 基因转染至 CHO 细胞中，通过筛选获得的单克隆细胞株。

功能特性  细胞表达 APP 蛋白 和 Aβ 蛋白。该细胞株常用于模拟阿尔茨海默病的病理过程，研究 Aβ 的生成机制。

筛选维持  培养基中通常需要添加 G418（250 μg/mL） 以维持 APP 基因的稳定表达。

主要应用  1. 阿尔茨海默病机制研究。

抗 Aβ 药物筛选及药效评价。

APP 代谢及剪切机制研究。

推荐培养体系

基础培养基：DMEM 高糖培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium, High Glucose）

血清添加：10% 胎牛血清 (FBS)

筛选压力：250 μg/mL G418（硫酸新霉素/遗传霉素）

培养环境：

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：维持培养箱内湿度 >90%。

详细培养操作指南

1. 细胞复苏 (Thawing)

预热：将水浴锅调至 37℃，预热完全培养基。

解冻：从液氮中取出冻存管，迅速放入 37℃ 水浴中，轻轻摇晃，使其在 1-2 分钟内 快速融化。

转移：用 75% 酒精擦拭冻存管外壁消毒，转入超净台。

稀释：将细胞悬液缓慢加入含有 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中（稀释 DMSO 毒性）。

离心：1000 rpm (约 250g) 离心 4 分钟。

接种：弃上清，加入新鲜完全培养基（含 G418）重悬，接种至 T25 培养瓶中，放入培养箱静置培养。

细胞传代 (Passage)

7WD10 为贴壁细胞。

观察：当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代。

清洗：弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液润洗细胞 1 次。

消化：加入适量消化液（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA），以覆盖瓶底为宜。

镜下观察：置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟，待细胞变圆或轻轻击打培养瓶侧壁发现细胞脱落时，迅速拿回操作台。

终止：加入含血清的完全培养基终止消化，轻轻吹打混匀。

离心：1000 rpm 离心 4 分钟。

重悬与分瓶：弃上清，加入新鲜完全培养基（含 G418）重悬，按 1:3 的比例进行分瓶传代（通常每 2-3 天传代一次）。

细胞冻存 (Freezing)

状态选择：选择对数生长期、活力好、形态佳的细胞。

计数：消化收集细胞，离心后重悬，进行细胞计数。

冻存液：推荐使用 基础培养基 + 10% DMSO + 20% FBS，或专用无血清冻存液。

密度：调整细胞密度至  cells/mL。

程序降温：分装入冻存管，使用程序降温盒（-80℃ 过夜），然后转入液氮罐长期保存。

关键注意事项

G418 筛选（重点）：为了维持 APP 基因的稳定表达，必须在培养基中持续添加 G418。如果撤去 G418，细胞可能会逐渐丢失外源基因的表达能力。

细胞形态：该细胞形态为梭形，类似成纤维细胞，在显微镜下观察时请注意与上皮样细胞区分。

运输脱落：CHO 细胞系（包括 7WD10）在运输过程中有时会出现少量脱落。若收到漂浮细胞，可离心收集后重新接种。

无菌操作：所有操作必须在生物安全柜内严格无菌操作。

支原体检测：建议定期检测支原体，确保细胞无污染。

公司正在出售的产品：

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注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。