人脑胶质瘤细胞;M059K

                                                          人脑胶质瘤细胞;M059K
产品信息：

这是一份关于人脑胶质瘤细胞（M059K）的详细说明、细胞特性及标准培养操作指南。

M059K 是神经胶质瘤研究中非常重要的细胞系，常与 M059J 细胞系配对使用，用于研究 DNA 损伤修复机制及肿瘤对放化疗的敏感性差异。

种属来源：人（Homo sapiens）

供体信息：33岁男性，患有恶性胶质瘤（Glioblastoma）

组织来源：大脑（Brain）

细胞形态：成纤维细胞样（Fibroblast-like）

生长特性：贴壁生长

基因特征：表达正常水平的 DNA 依赖蛋白激酶（DNA-PK），对电离辐射和某些化疗药物（如博来霉素、卡氮芥）具有较强的耐受性。

培养基：DMEM/F12 + 10% FBS

细胞特性与应用

特征维度  详细描述

背景简介  该细胞系是从一名未接受治疗的恶性胶质瘤患者的肿瘤样本中分离建系的。同时建系的还有 M059J。

耐药机制  M059K 表达正常的 DNA-PK 活性，能有效修复双链 DNA 损伤，因此对辐射和 DNA 损伤类药物不敏感。

对比模型  M059J 缺乏 DNA-PK 活性，对辐射极度敏感。M059K 与 M059J 可组成完美的对照模型，研究 DNA 修复机制。

主要应用  1. 脑胶质瘤发病机制研究。

放化疗增敏药物筛选。

DNA 损伤与修复机制研究。

推荐培养体系

基础培养基：DMEM/F12 (1:1 混合)

血清添加：10% 胎牛血清 (FBS)

双抗添加：1% 青霉素-链霉素 (P/S)（可选）

特殊添加：部分实验建议添加 1× 非必需氨基酸（NEAA）和 1× 丙酮酸钠。

培养环境：

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：维持培养箱内湿度 >90%。

详细培养操作指南

1. 细胞复苏 (Thawing)

预热：将水浴锅调至 37℃，预热完全培养基。

解冻：从液氮中取出冻存管，迅速放入 37℃ 水浴中，轻轻摇晃，使其在 1-2 分钟内 快速融化。

转移：用 75% 酒精擦拭冻存管外壁消毒，转入超净台。

稀释：将细胞悬液缓慢加入含有 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中（稀释 DMSO 毒性）。

离心：1000 rpm (约 250g) 离心 4-5 分钟。

接种：弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，接种至 T25 培养瓶中，放入培养箱静置培养。

细胞传代 (Passage)

M059K 为贴壁细胞。

观察：当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代。

清洗：弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液润洗细胞 1 次。

消化：加入 1-2 mL 消化液（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA），置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟。

镜下观察：在显微镜下观察，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台。

终止：轻敲培养瓶后，加入含血清的完全培养基终止消化。

离心：1000 rpm 离心 4-5 分钟。

重悬与分瓶：弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 到 1:5 的比例进行分瓶传代。

细胞冻存 (Freezing)

状态选择：待细胞生长状态良好时进行冻存。

消化：弃去培养基，加入少量胰酶消化，待细胞变圆脱落。

收集：加入含血清的培养基终止消化，混匀后转移至离心管。

离心：1000 rpm 离心 5-10 分钟，弃上清。

重悬：加入配置好的冻存液（90% 完全培养基 + 10% DMSO）重悬细胞。

分装：转移至冻存管中，放入程序降温盒（-80℃ 过夜），随后转入液氮罐长期保存。

关键注意事项

成纤维细胞形态：M059K 细胞在显微镜下呈现长梭形的成纤维细胞样形态，这与常见的上皮样细胞不同，请注意识别。

运输脱落：M059K 细胞贴壁相对较弱，在运输过程中容易发生脱落。若收到细胞发现瓶底有大量漂浮细胞，属正常现象。请将瓶内液体转移至离心管，离心收集细胞，弃上清，用 PBS 清洗一次，再用完全培养基重悬后接种回培养瓶中。

辐射敏感性：作为对照实验时，需牢记 M059K 对辐射和 DNA 损伤剂具有耐受性，而 M059J 极其敏感。

无菌操作：所有操作必须在生物安全柜内严格无菌操作。

支原体检测：建议定期检测支原体，确保细胞无污染。

公司正在出售的产品：

CCDC18 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白18抗体 0.2ml	Cav-1 ELISA Kit 大鼠窖蛋白Caveolin1
Rhesus antibody Rh phospho-P53(Ser376) 0酸化抑制基因P53抗体 规格 0.1ml	Anti-beta-Amyloid(25-35) β淀粉样肽(25-35)抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Integrin beta 5 整合素β5抗体 规格 0.1ml	Anti-PAX3/FITC 荧光素标记配对盒基因3抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
BMP11 英文名称： 骨形态发生蛋白11抗体 0.1ml	Beta-Nph(Mouse Beta-naphthol) ELISA Kit 小鼠β酚
Phospho-Progesterone Receptor(Ser190) 英文名称： 0酸化孕激素受体抗体 0.1ml	phospho-RGS19(Ser22) 英文名称： 0酸化G蛋白信号转导调节因子19抗体 0.1ml
Anti-ING1/p33 生长抑制因子基因1抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml	6-keto-PGF1a (Rabbit 6-keto-prostaglandin F1a) ELISA Kit 兔6酮素F1a
Acetyl-Histone H3(K18) 英文名称： 乙酰化组蛋白H3抗体 0.2ml	ACP(Human Acid Phosphatase) ELISA Kit 人酸性0酸酶
Cathepsin Z 英文名称： 组织蛋白酶z抗体 0.1ml	Anti- Beta-Amyloid(1-40)/FITC 荧光素标记β淀粉样肽(1-40)抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
Anti-Ataxin-1(phospho Ser776)/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠0酸化失调症蛋白1抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml	人脑胶质瘤细胞;M059KRhesus antibody Rh ZnT-1 锌转运蛋白1抗体 规格 0.2ml
CD133 antigen 英文名称： 造血干细胞抗原CD133抗体 0.1ml	CD2AP (CD2-associated protein) 白细胞分化抗原CD2AP 0.5mg

注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。