人正常气道上皮细胞;HBE4-E6/E7 新品

产品信息：

1. 细胞背景与基本特性

种属来源：人 (Homo sapiens)

组织来源：正常人支气管上皮组织

细胞形态：上皮细胞样（多边形），贴壁生长

生长特性：贴壁生长，呈铺路石状排列

生物安全等级：BSL-1 / BSL-2

关键特性：

永生化：通过 HPV16 E6/E7 基因转染实现，细胞核型正常。

无血清培养：通常推荐使用无血清培养基（如 Keratinocyte-SFM）以抑制成纤维细胞生长并促进上皮细胞增殖。

核心参数速览

特征  描述

培养基  角质形成细胞无血清培养基 (K-SFM)

传代比例  1:2 ～ 1:3 (首次建议 1:2)

消化时间  1-2 分钟 (胰酶消化)

倍增时间  约 24-48 小时

冻存条件  无血清冻存液 或 90% FBS + 10% DMSO

详细培养操作指南

HBE4-E6/E7 对培养基成分较为敏感，推荐使用无血清培养基以获得最佳生长状态。

基础培养条件

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：饱和湿度

推荐培养基配方

基础培养基：角质形成细胞无血清培养基 (Keratinocyte Serum Free Medium, K-SFM)。

注：通常包含基础培养基和添加物（如牛脑垂体提取物 BPE、表皮生长因子 EGF 等）。

替代配方：部分实验方案使用 DMEM/F12 培养基 + 10% 胎牛血清 (FBS)，但无血清培养基更有利于维持细胞特性。

特殊添加：根据试剂盒说明书添加 BPE 和 EGF（例如：0.05 mg/ml BPE, 5 ng/ml EGF）。

传代操作 (当细胞密度达 80%-90% 时)

弃液：吸去旧的培养上清液。

润洗：加入适量不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液，轻轻晃动润洗细胞层 1-2 次，弃去 PBS。

消化：加入 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 消化液（T25 瓶加 1-2 mL），置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟。

注意：HBE 细胞贴壁相对较弱，消化时间不宜过长。

观察：待细胞大部分变圆并脱落时，进行下一步。

终止：加入含血清的完全培养基（或含血清的缓冲液）终止消化。

离心与分装：将细胞悬液转移至离心管，1000 rpm 离心 3-5 分钟。弃上清，重悬后按 1:2 至 1:3 的比例分装到新瓶中。

冻存与复苏

冻存液：推荐使用无血清细胞冻存液，或者 90% 完全培养基 + 10% DMSO（现配现用）。

复苏：37℃ 水浴快速摇晃解冻，立即转移至含完全培养基的离心管中混匀，离心去除上清（去除 DMSO），重悬后接种。

注意事项与常见问题

培养基选择：

该细胞在含血清培养基中容易分化或停止增殖。建议优先使用 K-SFM 无血清培养基，以维持其未分化状态和高增殖活性。

运输中的脱落：

由于 HBE 细胞贴壁较弱，运输途中极易脱落漂浮。收到细胞后，若发现瓶底无细胞或细胞极少，请务必离心运输培养基，将管底沉淀的细胞团块重悬接种，不要直接丢弃。

支原体检测：

上皮细胞对支原体污染较为敏感，建议定期检测。

细胞状态：

若细胞密度过低（低于 60%），生长可能会变慢，建议保持适当的密度传代。

总结：HBE4-E6/E7 是一种贴壁生长的永生化气道上皮细胞。它的培养关键在于使用无血清培养基（K-SFM）和小心处理运输后脱落的细胞。该细胞系是研究肺部炎症、氧化应激及病毒感染（如流感、新冠病毒）的良好体外模型。

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细胞类型与特性

原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。

细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。

细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-50代。

根据生长方式分为：

贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。

悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。

半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。