神经外胚层肿瘤细胞;TC-71

                                                          神经外胚层肿瘤细胞;TC-71
产品信息：

这是一份关于人神经外胚层肿瘤细胞（TC-71）的详细说明、细胞特性及标准培养操作指南。

TC-71 细胞是尤文氏肉瘤（Ewing's Sarcoma）/原始神经外胚层肿瘤（PNET）研究领域中常用的细胞系。它具有典型的神经外胚层特征，常用于肿瘤机制研究、药物敏感性测试及细胞生物学基础研究。

细胞基本信息

种属来源：人（Homo sapiens）

组织来源：神经外胚层（Neuroectodermal）

疾病特征：尤文氏肉瘤 / 原始神经外胚层肿瘤（Ewing's Sarcoma / PNET）

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基：RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗

生物安全等级：BSL-2

细胞特性与应用

特征维度  详细描述

背景简介  TC-71 细胞于 1983 年建立，常用于尤文氏肉瘤的分子生物学研究。该细胞系表达多种神经标志物。

免疫特征  表达神经元特异性烯醇化酶（NSE）、CD99（MIC2）等标志物。

主要应用  1. 骨与软组织肿瘤研究。

抗肿瘤药物筛选与药效评价。

神经外胚层分化与凋亡机制研究。

推荐培养体系

基础培养基：RPMI-1640

血清添加：10% 胎牛血清 (FBS)（建议使用优质胎牛血清以促进贴壁和生长）

双抗添加：1% 青霉素-链霉素 (P/S)

培养环境：

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：维持培养箱内湿度 >90%。

详细培养操作指南

1. 细胞复苏 (Thawing)

预热：将水浴锅调至 37℃，预热完全培养基。

解冻：从液氮中取出冻存管，迅速放入 37℃ 水浴中，轻轻摇晃，使其在 1-2 分钟内 快速融化。

转移：用 75% 酒精擦拭冻存管外壁消毒，转入超净台。

稀释：将细胞悬液缓慢加入含有 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中（稀释 DMSO 毒性）。

离心：1000 rpm (约 250g) 离心 3-5 分钟。

接种：弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，接种至 T25 培养瓶中，放入培养箱静置培养。

细胞传代 (Passage)

TC-71 为贴壁细胞。

观察：当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代。

清洗：弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液润洗细胞 1 次。

消化：加入适量消化液（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA），以覆盖瓶底为宜。

镜下观察：置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟，在显微镜下观察，待细胞大部分变圆并脱落时，迅速拿回操作台。

终止：加入含血清的完全培养基终止消化，轻轻吹打混匀。

离心：1000 rpm 离心 5 分钟。

重悬与分瓶：弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 至 1:3 的比例进行分瓶传代。

细胞冻存 (Freezing)

状态选择：选择对数生长期、活力好、形态佳的细胞。

计数：消化收集细胞，离心后重悬，进行细胞计数。

冻存液：推荐使用 90% 完全培养基 + 10% DMSO，或专用无血清冻存液。

密度：调整细胞密度至   cells/mL。

程序降温：分装入冻存管，使用程序降温盒（-80℃ 过夜），然后转入液氮罐长期保存。

关键注意事项

贴壁特性：TC-71 细胞属于贴壁细胞，但在传代消化时，其贴壁牢固程度适中，需严格控制消化时间，避免消化过度导致细胞死亡。

运输脱落：在运输过程中，部分细胞可能会从瓶壁脱落。收到细胞后，若发现瓶底有漂浮细胞团，属正常现象。请将瓶内液体转移至离心管，离心收集细胞，弃上清，用 PBS 清洗一次，再用完全培养基重悬后接种回培养瓶中。

支原体检测：建议定期检测支原体，确保细胞无污染。

培养基选择：虽然 RPMI-1640 是标准培养基，但不同实验室可根据具体实验需求（如血清浓度或添加特定生长因子）进行微调。

STR鉴定：为确保细胞系的身份纯正，防止交叉污染，建议定期进行 STR 鉴定。

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注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。