人肺癌细胞;NCI-H3255

产品信息：

NCI-H3255 是一种经典的非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系，因其特定的基因突变特征，常被用于肺癌靶向治疗及耐药机制的研究。

细胞基本信息

种属来源：人（Homo sapiens）

供体信息：47岁白人女性

组织来源：胸腔积液（Pleural effusion）

疾病特征：肺腺癌（Lung adenocarcinoma）

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

基因特征：携带 EGFR L858R 点突变（第21号外显子），常伴随 TP53 突变（c.560-1G>A）。

细胞特性与应用

特征维度  详细描述

突变特征  该细胞最显著的特征是 EGFR L858R 突变，导致表皮生长因子受体酪氨酸激酶区组成性激活。

药物敏感性  对第一代 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）如吉非替尼（Gefitinib）、厄洛替尼（Erlotinib）高度敏感。

耐药模型  该细胞是构建获得性耐药模型的理想起始株，可通过长期药物暴露诱导产生如 T790M 突变、MET 扩增等耐药机制。

主要应用  1. EGFR突变肺癌生物学研究。

靶向药物敏感性及耐药机制探索。

新型EGFR抑制剂的药效评价。

推荐培养体系

基础培养基：RPMI-1640

血清添加：10% 胎牛血清 (FBS)（部分供应商建议使用 15% FBS 以获得更好生长状态）

双抗添加：1% 青霉素-链霉素 (P/S)

培养环境：

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：维持培养箱内湿度 >90%。

详细培养操作指南

1. 细胞复苏 (Thawing)

预热：将水浴锅调至 37℃，预热完全培养基。

解冻：从液氮中取出冻存管，迅速放入 37℃ 水浴中，轻轻摇晃，使其在 1-2 分钟内 快速融化。

转移：用 75% 酒精擦拭冻存管外壁消毒，转入超净台。

稀释：将细胞悬液缓慢加入含有 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中（稀释 DMSO 毒性）。

离心：1000 rpm (约 250g) 离心 3-5 分钟。

接种：弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，接种至 T25 培养瓶中，放入培养箱静置培养。

细胞传代 (Passage)

NCI-H3255 为贴壁细胞。

观察：当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代。

清洗：弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液润洗细胞 1 次。

消化：加入适量消化液（0.25% Trypsin-0.02% EDTA 或 Trypsin-EDTA），以覆盖瓶底为宜。

镜下观察：置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟，在显微镜下观察，待细胞大部分变圆并脱落时，迅速拿回操作台。

终止：加入含血清的完全培养基终止消化，轻轻吹打混匀。

离心：1000 rpm 离心 5 分钟。

重悬与分瓶：弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 至 1:3 的比例进行分瓶传代。

细胞冻存 (Freezing)

状态选择：选择对数生长期、活力好、形态佳的细胞。

计数：消化收集细胞，离心后重悬，进行细胞计数。

冻存液：推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或专用无血清冻存液。

密度：调整细胞密度至

程序降温：分装入冻存管，使用程序降温盒（-80℃ 过夜），然后转入液氮罐长期保存。

关键注意事项

EGFR突变状态：NCI-H3255 携带特定的 EGFR L858R 突变。在进行药物实验时，建议设置亲本细胞或耐药细胞作为对照。

耐药性监控：虽然该细胞对吉非替尼敏感，但在长期培养或药物诱导过程中，需定期检测其 IC50 值，以监控敏感性是否发生变化。

STR鉴定：建议定期进行 STR 鉴定，确保细胞身份的唯一性，防止交叉污染。

运输脱落：NCI-H3255 细胞贴壁相对较弱，在运输过程中容易发生脱落。若收到细胞发现瓶底有大量漂浮细胞，属正常现象。请将瓶内液体转移至离心管，离心收集细胞，弃上清，用 PBS 清洗一次，再用完全培养基重悬后接种回培养瓶中。

无菌操作：所有操作必须在生物安全柜内严格无菌操作。建议定期检测支原体，确保细胞无污染。

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细胞类型与特性

原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。

细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。

细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-50代。

根据生长方式分为：

贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。

悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。

半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。