荧光素酶标记的人原位胰腺癌细胞;BXPC-3-Luc

                                                          荧光素酶标记的人原位胰腺癌细胞;BXPC-3-Luc
产品信息：

1. 细胞基本特性与背景

来源背景： BXPC-3 细胞于 1984 年建立，取材于一名 61岁女性 患者的胰腺原位腺癌组织。

标记方式： 稳定表达荧光素酶（Luciferase），部分产品可能同时标记了 GFP。

生长特性： 贴壁生长。

细胞形态： 上皮细胞样（多角形）。

关键分子特征：

KRAS 野生型： 这一点非常特殊，因为大多数胰腺癌细胞系（如 PANC-1, MiaPaCa-2）都是 KRAS 突变型。BXPC-3 是研究 KRAS 野生型胰腺癌机制的重要模型。

p53 突变型： 表达突变的 p53 蛋白。

SMAD4 表达缺失： 这是胰腺癌中常见的抑癌基因缺失。

药物敏感性： 对吉西他滨（Gemcitabine）等化疗药物敏感。

培养条件与完全培养基配置

BXPC-3-Luc 的培养条件相对标准，但该细胞系有时生长较慢，且对环境变化较敏感。

基础培养基： RPMI-1640。

添加成分：

胎牛血清 (FBS)： 10%。

双抗 (Penicillin-Streptomycin)： 1%。

培养环境：

温度： 37℃。

气相： 5% CO，95% 空气。

湿度： 饱和湿度。

详细培养操作指南

细胞复苏

快速解冻： 将冻存管从液氮中取出，迅速放入 37℃水浴 中，轻轻摇晃，使其在 1 分钟内完全融化。

离心洗涤： 用酒精消毒管壁，将细胞悬液缓慢加入含 4-5 mL 预热完全培养基的离心管中混匀。1000 rpm 离心 3-5 分钟。

重悬接种： 弃去上清，加入适量完全培养基重悬细胞，接种到 T25 培养瓶中。

静置观察： 次日观察细胞贴壁情况。建议次日换液以去除残留的 DMSO。

细胞传代（当细胞密度达 80%-90% 时）

弃液洗涤： 弃去旧培养基，用不含钙镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

消化： 加入 0.25% 胰蛋白酶（Trypsin-EDTA，约 1-2 mL），放入 37℃ 培养箱消化 1-3 分钟。

注意：BXPC-3 细胞贴壁较牢固，消化时间可能比普通细胞稍长，需在显微镜下观察。

终止消化： 待细胞间隙变大、变圆脱落时，加入含血清的培养基终止消化。

离心分瓶： 将细胞悬液转移至离心管，1000 rpm 离心 5 分钟。弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 至 1:4 的比例分装传代。

细胞冻存

收集： 按传代步骤收集处于对数生长期的细胞。

冻存液： 推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或者专用的无血清冻存液。

程序降温： 将冻存管放入程序降温盒，置于 -80℃冰箱 过夜，第二天转入 液氮罐 长期保存。

关键注意事项（必读）

荧光素酶的维持（重要）：

为了维持 Luc 基因的稳定表达，防止发光强度随传代减弱，培养基中通常需要添加筛选抗生素（如 嘌呤霉素 Puromycin，通常筛选浓度为 1-5 μg/mL，具体需参考说明书）。

生长速度较慢：

BXPC-3 细胞属于生长较慢的胰腺癌细胞系，倍增时间约为 40-60 小时。请保持耐心，不要频繁换液打扰细胞。

贴壁特性：

该细胞贴壁非常牢固，传代时需适当延长胰酶消化时间。同时，它对机械损伤较敏感，吹打时动作要轻柔。

KRAS 野生型：

在进行信号通路研究或药物筛选时，请务必记住它是 KRAS 野生型，这与大多数胰腺癌模型不同。如果需要研究 KRAS 突变的影响，请选择 PANC-1 或 MiaPaCa-2。

应用场景：

由于其独特的分子特征，它常用于研究胰腺癌的耐药机制、肿瘤微环境以及靶向治疗。

总结

BXPC-3-Luc 是一个研究胰腺癌生物学行为和药物评价的宝贵工具。它的核心难点在于消化时间的控制（因为贴壁牢）和生长速度的预期管理（因为长得慢）。只要掌握好这两点，并定期进行抗生素筛选，它就能为你提供稳定、可视化的实验数据。

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注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。