荧光素酶标记的人肺腺癌细胞;NCI-H1975-Luc 新品

                                                          荧光素酶标记的人肺腺癌细胞;NCI-H1975-Luc
产品信息：

1. 细胞基本档案

特征维度  详细信息

亲本来源  人肺腺癌细胞 (NCI-H1975)

修饰方式  慢病毒转染携带 Luc 基因

标记物  稳定表达萤火虫荧光素酶

抗性筛选  嘌呤霉素 (Puromycin)

种属/性别  人 (女性，白人)

组织来源  肺腺癌

基因突变  EGFR L858R/T790M 双突变 (耐药突变)

生长特性  贴壁生长，上皮细胞样

核心特性与应用

为什么要选择NCI-H1975-Luc？

耐药机制研究： H1975是研究第三代EGFR抑制剂（如奥希替尼）耐药机制的首选模型。Luc标记后，你可以实时监测耐药株在体内的生长动力学。

活体药效评价： 用于评估新型第四代EGFR抑制剂、MET抑制剂或联合用药方案在体内的抗肿瘤活性。通过生物发光成像（BLI），可以无创地监测微小残留病灶（MRD）。

肿瘤转移示踪： 适用于构建肺腺癌的皮下瘤、原位瘤或转移模型，实时观察肿瘤的侵袭和转移过程。

培养操作手册

基础培养条件

培养基： RPMI-1640 基础培养基。

血清： 10% 胎牛血清 (FBS)。

添加剂： 1% 青霉素-链霉素 (P/S)。

环境： 37℃，5% CO，饱和湿度培养箱。

传代操作 (关键步骤)

H1975细胞贴壁相对较牢，且容易成团，消化是关键。

观察： 细胞密度达到 80%-90% 时进行传代（不要等完全长满，否则容易堆积死亡）。

清洗： 弃去旧培养基，用不含钙镁的 PBS 轻轻润洗一次。

消化： 加入适量的 0.25% 胰蛋白酶 (Trypsin-EDTA)，放入培养箱消化 1-3 分钟。

注意： 请在显微镜下观察，待细胞回缩变圆、间隙变大时即可。如果消化不下来，不要强行吹打，以免损伤细胞。

终止： 加入含血清的完全培养基终止消化。

吹打： 轻柔吹打使细胞完全脱落并分散均匀。H1975容易成团，建议吹打至无明显细胞团块。

离心： 1000 rpm 离心 3-5 分钟，弃上清。

重悬： 加入新鲜完全培养基，按 1:2 至 1:3 的比例传代到新瓶中。

收货处理 (如果是刚复苏或常温运输)

常温运输（T25瓶）： 收到后先不要打开，75%酒精消毒瓶壁，在培养箱中静置 1-2小时 让细胞适应环境。

注意： 运输途中可能会有细胞脱落，建议将培养基离心（1000rpm, 5min），弃上清，用PBS重悬沉淀后重新打入原瓶中继续培养。

干冰运输（冻存管）： 标准快速复苏流程（37℃水浴摇动融化），离心后重悬接种。

NCI-H1975-Luc 特有注意事项

抗生素维持（关键）：

为了维持Luc基因的稳定表达，防止长期培养后荧光丢失，必须定期使用嘌呤霉素（Puromycin）进行筛选。

建议浓度： 平时培养维持浓度通常为 1.0 μg/mL 左右（具体视构建时的筛选浓度而定）。如果不加压，荧光信号会随着传代次数增加而逐渐减弱。

空泡现象：

H1975细胞在高密度培养时，细胞质中可能会出现巨大的空泡。这属于该细胞系的正常生理特性，并非污染或细胞老化，无需过度担心。

STR鉴定：

建议定期进行STR鉴定，确保细胞身份正宗，且与 ATCC 数据库匹配度在 80% 以上。

总结

NCI-H1975-Luc = H1975 (EGFR耐药双突变) + Luc (活体可视化)。

它不仅是肺癌靶向治疗耐药研究的黄金标准，更是评估新型抗肿瘤药物体内疗效的强有力工具。

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注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。