荧光素酶标记的人非小细胞肺癌细胞;NCI-H23-Luc

                                                          荧光素酶标记的人非小细胞肺癌细胞;NCI-H23-Luc
产品信息：

这是一份关于荧光素酶标记的人非小细胞肺癌细胞（NCI-H23-Luc）的详细说明、细胞特性及标准培养操作指南。

该细胞系是在经典的 NCI-H23 细胞（人非小细胞肺癌细胞）基础上，通过基因工程手段稳定转染了荧光素酶（Luciferase）报告基因。它保留了亲本细胞的生物学特性，同时具备了生物发光能力，是肺癌肿瘤生长、转移及药物疗效评价研究中的重要工具。

细胞基本信息

种属来源：人（Homo sapiens）

供体信息：51岁男性，黑人，患有非小细胞肺癌

组织来源：肺（Lung）

标记基因：荧光素酶（Luciferase），通常伴随嘌呤霉素（Puromycin）抗性基因。

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

基因突变：携带 K-ras 12号密码子突变，p53基因246号密码子突变。

细胞特性与应用

特征维度  详细描述

背景简介  该细胞源于一位51岁非小细胞肺癌患者的治疗前肿瘤组织。

荧光特性  稳定表达荧光素酶，加入底物 D-luciferin 后可产生生物发光，适用于活体成像（In Vivo Imaging）和体外药敏实验。

筛选维持  为了维持荧光素酶基因的稳定表达，通常需要在培养基中添加嘌呤霉素（Puromycin）进行筛选（具体浓度需参考供应商说明书）。

主要应用  1. 肺癌肿瘤生长与转移示踪。

抗肿瘤药物筛选与药效评价。

K-ras信号通路相关机制研究。

推荐培养体系

基础培养基：RPMI-1640

血清添加：10% 胎牛血清 (FBS)

双抗添加：1% 青霉素-链霉素 (P/S)

筛选维持：Puromycin (嘌呤霉素)，推荐浓度通常为 1-10 μg/mL（具体浓度请参考购买时的说明书）。

培养环境：

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：维持培养箱内湿度 >90%。

详细培养操作指南

1. 细胞复苏 (Thawing)

预热：将水浴锅调至 37℃，预热完全培养基。

解冻：从液氮中取出冻存管，迅速放入 37℃ 水浴中，轻轻摇晃，使其在 1-2 分钟内 快速融化。

转移：用 75% 酒精擦拭冻存管外壁消毒，转入超净台。

稀释：将细胞悬液缓慢加入含有 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中（稀释 DMSO 毒性）。

离心：1000 rpm (约 250g) 离心 3-5 分钟。

接种：弃上清，加入新鲜完全培养基（含嘌呤霉素）重悬，接种至 T25 培养瓶中，放入培养箱静置培养。

细胞传代 (Passage)

NCI-H23-Luc 为贴壁细胞。

观察：当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代。

清洗：弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液润洗细胞 1 次。

消化：加入适量消化液（0.25% Trypsin-0.02% EDTA），以覆盖瓶底为宜。

镜下观察：置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟，在显微镜下观察，待细胞大部分变圆并脱落时，迅速拿回操作台。

终止：加入含血清的完全培养基终止消化，轻轻吹打混匀。

离心：1000 rpm 离心 5 分钟。

重悬与分瓶：弃上清，加入新鲜完全培养基（含嘌呤霉素）重悬，按 1:2 至 1:3 的比例进行分瓶传代。

细胞冻存 (Freezing)

状态选择：选择对数生长期、活力好、形态佳的细胞。

计数：消化收集细胞，离心后重悬，进行细胞计数。

冻存液：推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或专用无血清冻存液。

密度：调整细胞密度至 cells/mL。

程序降温：分装入冻存管，使用程序降温盒（-80℃ 过夜），然后转入液氮罐长期保存。

关键注意事项

荧光维持（重点）：NCI-H23-Luc 细胞在长期传代过程中，荧光素酶的表达可能会丢失。因此，必须在平时的培养基中添加筛选抗生素（嘌呤霉素）以维持压力。若发现荧光明显变弱，可进行短期的高浓度抗生素筛选。

运输脱落：NCI-H23 细胞贴壁相对较弱，在运输过程中容易发生脱落。若收到细胞发现瓶底有大量漂浮细胞，属正常现象。请将瓶内液体转移至离心管，离心（1000 rpm, 5 min）收集细胞，弃上清，用 PBS 清洗一次，再用完全培养基重悬后接种回培养瓶中。

K-ras突变：该细胞携带 K-ras 突变，这在肺癌研究中具有重要意义，但在实验设计时需注意其对特定信号通路抑制剂的敏感性。

无菌操作：所有操作必须在生物安全柜内严格无菌操作。

支原体检测：建议定期检测支原体，确保细胞无污染。

如何用NCI-H23-Luc细胞进行药物筛选实验？

K-ras突变对NCI-H23-Luc细胞实验设计有何影响？

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注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。