荧光素酶标记的人结直肠腺癌细胞;Caco-2-Luc 新品

                                                          荧光素酶标记的人结直肠腺癌细胞;Caco-2-Luc
产品信息：

1. 细胞背景与基本特性

母细胞来源：Caco-2 细胞分离自一名 72 岁男性结直肠腺癌患者的直肠原位癌组织。

标记方式：通常通过慢病毒转导，稳定整合 Luc 基因（可能带有嘌呤霉素抗性基因 Puro）。

关键生物学特征：

自发分化：当细胞生长至汇合（长满）时，会自发分化为类似小肠上皮细胞的形态，形成紧密连接和刷状缘。

药物转运模型：因其分化后的特性与小肠上皮高度相似，是国际公认的药物吸收筛选模型（Caco-2 模型）。

表达特性：表达人绒毛膜酶（碱性磷酸酶）、角蛋白、以及多种药物转运蛋白（如 P-gp）。

荧光素酶特性：细胞稳定表达荧光素酶，加入底物 D-Luciferin 后可产生生物发光信号，可用于活体追踪肿瘤生长和转移。

形态  上皮细胞样

生长特性  贴壁生长

生物安全等级  BSL-1

倍增时间  约 24-72 小时（生长较慢）

主要应用  结直肠癌研究、药物吸收模型、活体成像、毒性测试

详细培养操作指南

Caco-2-Luc 细胞的培养难点在于贴壁慢和消化难，且对血清质量较敏感。

基础培养条件

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：饱和湿度

推荐培养基配方

Caco-2 对培养基要求较高，通常需要添加非必需氨基酸：

基础培养基：MEM (Minimum Essential Medium) 或 DMEM（高糖）。

血清：10% - 20% 胎牛血清 (FBS)（建议使用优质血清，血清比例降低会导致贴壁变差）。

特殊添加：

非必需氨基酸 (NEAA)：1%（这是 Caco-2 细胞生长的关键营养素）。

双抗：1% 青霉素-链霉素 (P/S)。

针对 Luc 标记：若细胞带有 Puro 抗性，平时培养可不加，但建议定期用 0.6 - 1.2 μg/mL 嘌呤霉素维持筛选，防止荧光素酶基因丢失。

传代操作 (关键步骤：难消化)

观察：Caco-2 生长缓慢，通常 5-7 天传代一次。当细胞密度达 80%-90% 时进行。

弃液与润洗：吸去旧液，用 PBS 润洗 1-2 次，去除残留血清。

消化：加入 0.25% 胰蛋白酶-EDTA（T25 瓶加 1 mL）。注意：Caco-2 细胞间连接紧密，消化时间较长（通常 5-10 分钟）。

分次消化法：由于消化不均匀，建议显微镜下观察。当部分细胞开始脱落时，可先吸出这部分细胞终止消化，剩余贴壁牢固的细胞再加入新鲜胰酶继续消化。

终止与离心：加入含血清的培养基终止消化，吹打均匀后离心（1000 rpm, 3-5 min）。

重悬与分装：弃上清，用新鲜培养基重悬，按 1:2 至 1:3 比例分装。

复苏操作 (关键步骤：贴壁慢)

慢贴壁：Caco-2-Luc 复苏后贴壁非常慢，通常需要 24-48 小时才能完全贴壁。

操作建议：复苏后 48 小时内不要移动培养瓶观察，也不要换液，以免干扰细胞贴壁。

注意事项与常见问题

细胞内空泡：

在高密度培养时，Caco-2 细胞质中常出现巨大的空泡。这是该细胞系的正常生理特性，并非污染或老化，无需担心。

黑色颗粒/黑点：

培养液中可能出现黑色颗粒或黑点，这通常与细胞代谢产物或血清质量有关。只要细胞状态良好、增殖正常，通常不影响实验。

消化成团：

Caco-2 很难被消化成单个细胞，通常呈细胞团块状脱落。吹打时不要过度用力，以免损伤细胞膜，吹散成小团即可。

荧光信号不稳定：

由于 Caco-2 生长周期长，长期传代可能导致外源基因沉默。建议在液氮中多储备早期代次的细胞，并定期检测荧光素酶活性。

支原体污染：

该细胞易受支原体污染，表现为细胞生长缓慢、碎片增多。建议定期检测。

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注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。