荧光素酶标记的人结直肠腺癌上皮细胞;DLD-1-Luc 新品

产品信息：

细胞基本信息

别称：DLD 1-Luc; CoCL3-Luc

种属来源：人（Homo sapiens）

供体信息：成年男性

组织来源：结直肠腺癌（Colorectal Adenocarcinoma）

标记基因：荧光素酶（Luciferase, Luc），通常伴随嘌呤霉素（Puromycin）抗性基因。

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

生物安全等级：BSL-1 / BSL-2（建议按 BSL-2 操作）

细胞特性与应用

特征维度  详细描述

遗传背景  DLD-1 细胞携带 APC、K-Ras 和 p53 基因突变，这与临床结直肠癌患者的基因突变谱高度相似，使其成为研究结直肠癌机制的理想模型。

荧光特性  稳定表达荧光素酶，加入底物 D-luciferin 后可产生生物发光。部分产品可能同时表达 GFP（绿色荧光蛋白），便于在体外通过荧光显微镜直接观察。

筛选维持  为了维持荧光素酶基因的稳定表达，防止质粒丢失，通常需要在培养基中添加嘌呤霉素（Puromycin）进行筛选。

主要应用  1. 活体成像（In Vivo Imaging）：实时监测肿瘤在小鼠体内的生长位置、大小及转移情况。

抗肿瘤药物药效学评价：通过发光强度的变化定量评估药物对肿瘤生长的抑制作用。

肿瘤微环境与转移研究。

推荐培养体系

为了维持 DLD-1-Luc 细胞的良好状态及荧光稳定性，建议使用以下培养条件：

基础培养基：RPMI-1640

血清添加：10% 胎牛血清 (FBS)

双抗添加：1% 青霉素-链霉素 (P/S)（常规培养可不加，但建议在运输恢复期或公共实验室添加）

筛选维持：Puromycin (嘌呤霉素)，推荐浓度通常为 1-10 μg/mL（具体浓度请参考购买时的说明书，建议每 2-3 代进行一次高浓度筛选以维持荧光强度）。

培养环境：

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：维持培养箱内湿度 >90%。

详细培养操作指南

1. 细胞复苏 (Thawing)

预热：将水浴锅调至 37℃，预热完全培养基。

解冻：从液氮中取出冻存管，迅速放入 37℃ 水浴中，轻轻摇晃，使其在 1 分钟内 快速融化。

转移：用 75% 酒精擦拭冻存管外壁消毒，转入超净台。

稀释：将细胞悬液缓慢加入含有 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中（稀释 DMSO 毒性）。

离心：1000 rpm (约 250g) 离心 3-5 分钟。

接种：弃上清，加入新鲜完全培养基（含嘌呤霉素）重悬，接种至 T25 培养瓶中，放入培养箱静置培养。

细胞传代 (Passage)

DLD-1-Luc 为贴壁细胞，但部分克隆可能贴壁较紧或较松。

观察：当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代。

清洗：弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液润洗细胞 1 次。

消化：加入适量消化液（0.25% Trypsin-0.02% EDTA），以覆盖瓶底为宜。

镜下观察：置于 37℃ 培养箱中消化 2-5 分钟（DLD-1 细胞消化时间可能稍长，需镜下观察），待细胞变圆、间隙变大并脱落时，迅速拿回操作台。

终止：加入含血清的完全培养基终止消化，轻轻吹打混匀。

离心：1000 rpm 离心 5 分钟。

重悬与分瓶：弃上清，加入新鲜完全培养基（含嘌呤霉素）重悬，按 1:3 至 1:6 的比例进行分瓶传代。

细胞冻存 (Freezing)

状态选择：选择对数生长期、活力好、形态佳的细胞。

计数：消化收集细胞，离心后重悬，进行细胞计数。

冻存液：推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或专用无血清冻存液。

程序降温：分装入冻存管，使用程序降温盒（-80℃ 过夜），然后转入液氮罐长期保存。

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细胞类型与特性

原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。

细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。

细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-50代。

根据生长方式分为：

贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。

悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。

半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。