荧光素酶/GFP标记的人多发性骨髓瘤细胞;MM.1S-Luc-GFP

                                                          荧光素酶/GFP标记的人多发性骨髓瘤细胞;MM.1S-Luc-GFP
产品信息：

1. 细胞基本档案

特征维度  详细信息

亲本来源  人多发性骨髓瘤细胞 (MM.1S)

修饰方式  慢病毒转染携带 Luc + GFP 双基因

标记物  稳定表达荧光素酶 + 绿色荧光蛋白

抗性筛选  通常携带嘌呤霉素 (Puromycin) 或其他抗性基因

种属/性别  人 (女性，非裔美国人)

组织来源  外周血 (来源于对类固醇耐药患者的外周血)

核心特性与应用

为什么要选择MM.1S-Luc-GFP？

相比于单一标记，双标记（Luc + GFP）提供了更灵活的检测手段。

双重检测优势：

Luc（体内）： 用于活体成像（IVIS），监测小鼠体内的肿瘤负荷、骨髓浸润及药物疗效。

GFP（体外/显微镜）： 用于流式细胞术（FACS）分选或计数，以及在荧光显微镜下直接观察细胞形态和吞噬情况。

地塞米松敏感性： MM.1S亲本细胞对地塞米松（Dexamethasone）敏感，这使其成为研究多发性骨髓瘤类固醇敏感性及耐药机制（与MM.1R对比）的经典模型。

免疫表型： 表达CD38, CD52, CD59等骨髓瘤标志物，不表达CD19/CD20。

培养操作手册（保姆级）

基础培养条件

培养基： RPMI-1640 基础培养基。

血清： 10% 优质胎牛血清 (FBS)。

添加剂： 1% 青霉素-链霉素 (P/S)。

环境： 37℃，5% CO，饱和湿度培养箱。

传代操作 (关键难点：半贴壁)

MM.1S细胞既有悬浮生长的，也有贴壁不牢的。传代时必须将两者都收集起来，否则细胞活性会大幅下降。

收集悬浮细胞： 轻轻吹打T25培养瓶，将悬浮的细胞和培养基转移到离心管中。

处理贴壁细胞：

弃去上清（已收集），用PBS轻轻润洗贴壁细胞一次（润洗液也要收集到离心管中，因为会有细胞脱落）。

加入胰酶（Trypsin-EDTA），37℃消化1-2分钟，直到贴壁细胞变圆脱落。

加入完全培养基终止消化，并吹打混匀。

合并： 将步骤1和步骤2的所有液体合并到一个离心管中。

离心： 1000 rpm (约200-300g) 离心 5-10 分钟。

重悬： 弃上清，加入新鲜完全培养基重悬。

分瓶： 按 1:2 至 1:4 的比例传代。

冻存与复苏

冻存液： 90% 血清 + 10% DMSO，或者专用无血清冻存液。

复苏： 37℃水浴快速摇动融化，离心去除DMSO，重悬接种。

注意： MM.1S细胞复苏后生长较慢，通常需要 2周左右 才能恢复正常的生长状态和对数增殖，请耐心等待，不要频繁换液。

MM.1S-Luc-GFP 特有注意事项

抗生素维持（关键）：

为了维持Luc和GFP基因的稳定表达，防止长期培养后荧光丢失，建议在培养基中添加筛选药物（通常是 Puromycin 嘌呤霉素）。具体浓度请参考你构建细胞时的MOI值或购买说明书（通常在 1-2 μg/mL 左右）。

细胞状态监控：

该细胞容易成团，传代时要吹打均匀。

黑点较多是此类细胞的常态，只要不是细菌或真菌污染，及时换液即可。

STR鉴定：

建议定期进行STR鉴定，确保细胞系没有发生交叉污染。

总结

MM.1S-Luc-GFP = MM.1S (地塞米松敏感) + Luc (活体定量) + GFP (流式/显微镜追踪)。

它是一个功能强大的双报告基因工具，特别适合需要同时进行体内药效评价（用Luc）和体外机制验证（用GFP流式分选）的多发性骨髓瘤研究项目。

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注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。