荧光素酶/GFP标记的人卵巢癌细胞;OVCAR3-Luc-GFP 新品

                                                          荧光素酶/GFP标记的人卵巢癌细胞;OVCAR3-Luc-GFP
产品信息：

1. 细胞基本特性与背景

来源背景： OVCAR-3 细胞由 T.C. Hamilton 于 1982 年建立，取材于一位 60岁女性 患者的恶性腹水（进展期卵巢腺癌）。

标记方式： 通过慢病毒转染，稳定整合了 Luc 和 GFP 双报告基因。

生长特性： 贴壁生长（需要附着在培养瓶表面）。

细胞形态： 上皮细胞样（卵圆形或多角形）。

生物安全等级： BSL-1。

特殊性质：

耐药性： 对阿霉素（Doxorubicin）、美法仑（Melphalan）和顺铂（Cisplatin）具有耐药性，是研究卵巢癌耐药机制的理想模型。

激素受体： 表达雄激素受体（AR）、雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR），适合用于激素治疗相关的研究。

培养条件与完全培养基配置

OVCAR-3 细胞对培养基的要求相对特殊，胰岛素（Insulin） 是其生长的关键添加物。

基础培养基： RPMI-1640。

添加成分：

胎牛血清 (FBS)： 20%（注意：通常需要比普通细胞更高的血清浓度）。

胰岛素 (Insulin)： 10 μg/mL（这是关键生长因子，不可省略）。

双抗 (P/S)： 1%（青霉素/链霉素）。

培养环境： 37℃，5% CO，饱和湿度。

详细培养操作指南

细胞复苏

快速解冻： 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴 中，快速摇晃直至完全融化（不留冰晶）。

离心去毒： 用75%酒精擦拭管壁，转移至超净台。将细胞悬液缓慢加入含 5mL 预热完全培养基的离心管中，混匀。1000 rpm 离心 5 分钟。

接种培养： 弃上清，加入 5mL 完全培养基重悬，接种至 T25 培养瓶。

次日换液： 建议第二天更换新鲜培养基，以去除残留的 DMSO 和死细胞。

细胞传代（当细胞密度达 80%-90% 时）

弃液洗涤： 弃去旧培养基，用 PBS 或无钙镁离子的缓冲液润洗细胞一次。

消化： 加入 0.25% 胰蛋白酶（约 1-2mL），放入 37℃ 培养箱消化 1-2 分钟。

观察终止： 显微镜下观察，待细胞间隙变大、细胞变圆但尚未完全脱落时，加入含血清的培养基终止消化（血清中的蛋白酶抑制剂会停止反应）。

吹打分瓶： 轻轻吹打使细胞完全脱落，转移至离心管，1000 rpm 离心 5 分钟。

重悬： 弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 至 1:4 的比例传代。

细胞冻存

收集： 按传代步骤收集对数生长期的细胞。

冻存液： 推荐使用 90% 完全培养基 + 10% DMSO，或者专用的无血清冻存液。

程序降温： 使用程序降温盒，或直接放入 -80℃ 冰箱（若长期保存，24小时后转入液氮）。

关键注意事项（必读）

抗生素筛选（维持发光）：

为了维持 Luc 和 GFP 基因的稳定表达，防止细胞在传代过程中丢失标记，培养基中通常需要添加筛选抗生素（如嘌呤霉素 Puromycin 或 G418，具体取决于构建载体时使用的抗性基因）。

注意：如果你的细胞是刚复苏的第一代，建议先培养 1-2 代后再加压筛选，以免细胞状态不佳导致死亡。

胰岛素是关键：

普通 RPMI-1640 培养基不含胰岛素，必须额外添加。如果缺少胰岛素，细胞生长会非常缓慢甚至停止。

贴壁特性：

OVCAR-3 细胞贴壁相对较牢，但部分亚系或标记后细胞可能会出现轻微的“抱团”或半贴壁状态。消化时需严格控制时间，避免消化过度损伤细胞。

活体成像应用：

作为双标记细胞，它非常适合多模态成像。你可以先用 GFP 在体外验证细胞状态，再用 Luc 在裸鼠体内进行长期药效观察。

总结

OVCAR-3-Luc-GFP 是一个功能强大的卵巢癌研究模型。它结合了耐药性、激素敏感性以及双报告基因的优势。只要注意添加 20% FBS 和 胰岛素，并定期进行抗生素筛选，它就能为你提供稳定、可视化的实验数据，特别适合用于抗肿瘤药物体内评价及肿瘤微环境研究。

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注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。