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乳液外泌体提取纯化试剂盒

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-K1098

描述及优势：外泌体 (Exosome) 是由细胞分泌的包含 RNA 和蛋白质的小囊泡 (30 - 150 nm)，广泛存在于血液、唾液、尿液及乳汁等体液中。外泌体具有细胞信使功能，参与细胞通讯。MCE 乳液外泌体提取纯化试剂盒使用独特的分离技术，可快速高效地从乳液中分离纯化外泌体，且获得的外泌体纯度和活性较高，可用于电镜分析、NTA 粒径分析、 Western Blot、 qPCR、细胞生物学和动物实验等。

操作流程：样本预处理1. 实验准备离心机使用前 4°C 预冷 10 min。2. 取样：冻存样本 25°C 水浴解冻后置于冰上待用；新鲜样本直接置于冰上待用。注：单次提取时建议乳液用量 ≥ 25 mL。3. 离心除杂4°C 10,000 g (9,500 rpm) 离心 20 min。离心后可观察到样品分为三层：上层为脂质层，中间层为乳清，下层为蛋白沉淀，取中间层乳清至 50 mL 离心管中。注：a. 取中间层液体时可用枪头将上层脂质层戳破，缓慢将中间层倒出或用移液器转移。b. 收集的中间层乳清带有少量上层脂质和蛋白沉淀为正常显现，一般不影响后续实验。c. 若观察到上层“松软”、“易脱落”且下层沉淀较多，可重复以上离心操作每次取中间层液体。d. 以上离心操作基于大离心机 (有效半径 ~ 10 cm) 和 ≥ 15 mL 离心管条件进行。下同。 去除杂蛋白1. 按表 1 比例在上述收集的乳清中加入缓冲液 A，立即将离心管盖盖紧，颠倒使其充分混匀至呈现“半透明状”。2. 加入缓冲液 B，颠倒混匀后置于 4°C 静置孵育 10 min。注：静置孵育后可轻摇离心管，可观察到固体呈现“豆花状”，液体呈现“透明状”。若未呈现“豆花状”或样品仍呈现“乳白色”，可再加入适量缓冲液 B至液体为“透明状”。3. 将澄清后的乳清 4°C 10,000 g (9,500 rpm) 离心120 min，收集上清。4. 将收集的上清液转移至离心过滤柱 (50 mL) 中，4°C 5,200 g (3,000 rpm) 离心 2 min。注：a. 若单次不能完全过滤，可分多次离心过滤。b. 离心过滤柱位一次性耗材，不建议重复使用。5. 在过滤后的上清液中加入缓冲液 C，颠倒混匀。外泌体提取1. 在上述样本中加入缓冲液 D，立即将离心管盖盖紧，涡旋振荡 1 min 使其充分混匀。4°C 静置孵育 1 h 以上。注：延长以上静置孵育时间可提高外泌体得率，但不可超过 24 h。2. 4°C 10,000 g (9,500 rpm) 离心 60 min，收集沉淀。尽可能吸尽上清，沉淀中富含外泌体颗粒。3. 4°C 10,000 g (9,500 rpm) 离心 2 min，收集沉淀。4. 取适量 PBS (1×) 重悬外泌体沉淀使其充分溶解并转移至 1.5 mL 离心管中。注：建议每 20 mL 乳清样本对应外泌体沉淀用 160 μL PBS 重悬。5. 4°C 12,000 g (12,400 rpm) 离心 2 min，收集上清。上清中富含外泌体颗粒。注：a. 若观察到沉淀较多，可重复以上离心操作直至无明显沉淀。b. 外泌体溶液可能呈现淡淡的乳白色，为正常现象。c. 以上离心操作基于小离心机 (有效半径 ~ 7 cm) 和 ≤ 2 mL 离心管条件进行。 外泌体保存将纯化的外泌体分装后于 -80°C 保存备用，避免反复冻融。

详情参考：www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/exosome-isolation-and-purification-kit-from-milk.html