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细胞亚铁离子 (Fe2+) 检测试剂盒

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-K0322

存储条件：-20℃，6 个月 避光保存

产品活性：MCE 细胞亚铁离子 (Fe2+) 检测试剂盒（荧光法）通过荧光检测技术分析细胞中的亚铁离子 (Fe2+) 水平。

描述及优势：铁是生物体内的重要金属元素，具有多种生理功能。亚铁离子是血红素和血红蛋白的核心成分，并在许多生化反应中发挥关键作用。近年来，随着铁死亡 (Ferroptosis) 概念的提出，研究人员发现铁离子在细胞内的吸收、运输、储存与利用以及过度积累，均与衰老和多种疾病密切相关。 MCE 细胞亚铁离子 (Fe2+) 检测试剂盒（荧光法）通过荧光检测技术分析细胞中的亚铁离子 (Fe2+) 水平。检测原理为：荧光探针可进入细胞内并与细胞内 Fe2+特异性结合，生成不可逆的橙红色荧光产物 (Ex/Em = 543/580 nm)，通过检测荧光信号实现对细胞内亚铁离子( Fe2+) 的检测。以 96 孔为例，100 T 规格至少可满足 100 个孔样品的检测。

操作流程：预实验确认染色液的最佳浓度（可选） 由于不同细胞种类、细胞浓度的染色条件不同，建议进行预实验摸索荧光探针的最佳浓度。常规细胞染色，荧光探针的工作浓度可在 1 - 5 μM 之间调整。 染色工作液的配制 以下以荧光探针工作浓度为 1 μM 为例。（也可根据预实验确定最佳浓度） 注：一般满足信号足够的前提下，建议尽可能选择最低浓度的荧光探针剂量进行实验。 1. 试剂准备：取出荧光探针和染色缓冲液，室温平衡 30 min。 注：建议首次使用时将荧光探针适当分装，避免反复冻融。 2. 染色工作液准备：取适量染色缓冲液，加入适量荧光探针稀释 2000 倍，充分混匀制备染色工作液，荧光探针终浓度为 1 μM。 注：a. 根据样品数和孔板类型计算所需的染色工作体积。以 96 孔为例，每孔需要 100 μL 染色工作液。 b. 染色工作液建议现配现用，配制好后避光，当天使用。 染色 贴壁细胞染色 1. 将贴壁细胞接种至细胞培养板、微孔板或制成细胞爬片，在培养箱中过夜培养。 注：悬浮细胞也可制成细胞爬片，按贴壁细胞步骤进行染色。 2. 弃上清液并用无血清培养基或 PBS 洗涤细胞 2 - 3 次。 3. 根据实验设计药物处理细胞后，用染色缓冲液洗涤细胞 2 - 3 次。 4. 加入足量染色工作液，保证单层细胞被充分覆盖。 5. 37ºC 培养箱孵育 20 - 60 min。 注：生成的荧光产物容易淬灭，建议孵育后 2 h 内完成检测。 悬浮细胞染色（以 96 孔板为例） 1. 1,000 rpm 离心 3 min，弃上清收集细胞并用无血清培养基或 PBS 洗涤细胞 2 - 3 次。 2. 根据实验设计药物处理细胞后，1,000 rpm 离心 3 min，弃上清收集细胞并用染色缓冲液洗涤细胞 2 - 3 次。 注：建议细胞量为 1 × 104 - 1 × 105。 3. 细胞沉淀用 100 μL 染色工作液重悬，37ºC 培养箱孵育 15 - 30 min。 注：生成的荧光产物容易淬灭，建议孵育后 2 h 内完成检测。 荧光检测与分析 贴壁细胞：染色孵育结束后无需清洗，直接在荧光显微镜下观察细胞 (Ex/Em = 543/580 nm)。 悬浮细胞：染色孵育结束后无需清洗，直接用荧光酶标仪或流式细胞仪进行检测 (Ex/Em = 543/580 nm)。 注：染色孵育后无需更换培养基或清洗细胞，更换培养基可能会导致探针泄露至胞外影响检测结果。

详情参考：www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/cell-ferrous-iron-fe2-assay-kit-fluorometric.html