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双荧光素酶试剂盒

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-K1013

中文名称：双荧光素酶试剂盒

存储条件：-20℃, 1年避光保存

产品活性：MCE 双荧光素酶试剂盒含有高纯度的 D-荧光素、腔肠素以及比例优化的反应缓冲液，实现哺乳动物细胞双萤光素酶报告基因检测。

生物活性：MCE 双荧光素酶试剂盒中含有高纯度的D-荧光素、腔肠素以及比例优化的反应缓冲液。在双荧光素酶反应中，首先用 Firefly Luciferase Working Solution (含D-荧光素)检测萤火虫荧光素酶信号；随后，直接加入 Renilla Luciferase Working Solution (含腔肠素)，将萤火虫荧光素酶的信号猝灭，同时产生海肾荧光素酶信号。本试剂盒具有操作简单、检测快捷、灵敏度高等优点。

描述及优势：

MCE 双荧光素酶试剂盒中含有高纯度的D-荧光素、腔肠素以及比例优化的反应缓冲液。在双荧光素酶反应中，首先用 Firefly Luciferase Working Solution (含D-荧光素)检测萤火虫荧光素酶信号；随后，直接加入 Renilla Luciferase Working Solution (含腔肠素)，将萤火虫荧光素酶的信号猝灭，同时产生海肾荧光素酶信号。本试剂盒具有操作简单、检测快捷、灵敏度高等优点。

操作流程：1. 配制试剂 1.1 Lysis Buffer (1×) 的配制 将 Lysis Buffer (5×) 用超纯水稀释 5 倍，配制成 1× 工作液。 1.2 萤火虫荧光素酶工作液 (Firefly Luciferase Working Solution) 的配制 将 Firefly Luciferase Substrate 干粉管短暂离心后开盖，加入 1 mL Firefly Luciferase Buffer 将其全部溶解并混合均匀，然后将全部溶液移入剩余的 9 mL Firefly Luciferase Buffer 中，混匀。 1.3 海肾荧光素酶工作液 (Renilla Luciferase Working Solution) 的配制 将 Renilla Luciferase Substrate 短暂离心后开盖，加入 1 mL Renilla Luciferase Buffer 混合均匀，然后将全部溶液移入剩余的 9 mL Renilla Luciferase Buffer 中，混匀。 Note: 所有试剂使用前需平衡至室温。萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶工作液配制完成后，分装、避光保存，避免反复冻融，-80℃可保存一年，-20℃可保存一个月。 2. 裂解细胞 2.1 细胞裂解时密度应小于 95%，细胞生长过密，易导致裂解不充分。质粒瞬转、病毒感染细胞后，需培养一段时间 (一般 48 小时)使荧光素酶充分表达。 2.2 去除培养基，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 1 遍，注意不要将细胞吹起。 2.3 加入适量的 1× Lysis Buffer，用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。推荐用量见下表 孔板类型 Lysis Buffer/孔 6-孔板 500 μL 12-孔板 200 μL 24-孔板 100 μL 48-孔板 50 μL 96-孔板 30 μL 2.4 将细胞培养板置于摇床上，室温、轻晃孵育 15 分钟。 注：细胞数量较高时，可适当加大裂解液用量、延长裂解时间。 2.5 将裂解物转移到新的离心管中，4℃、12,000 rpm 离心 10 分钟，取上清备用。 3. 荧光检测 3.1 取 20 μL 细胞裂解物，加至 96 孔黑色不透底酶标板中。 3.2 取 100 μL 平衡至室温的萤火虫荧光素酶工作液加至上述反应板中，混匀后，用酶标仪测定萤火虫荧光素酶信号。 3.3 取 100 μL 平衡至室温的海肾荧光素酶工作液加至上述反应板中，混匀后，用酶标仪测定海肾荧光素酶信号。 3.4 结果分析：在以海肾萤光素酶为内参的情况下，用萤火虫萤光素酶所得发光值除以海肾萤光素酶所得发光值。根据得到的比值来比较不同样品间目的报告基因的激活程度。 注：为了确保实验结果准确性，萤火虫荧光素酶 (fLuc) 和海肾荧光素酶 (rLuc) 的发光值均应为相对发光值 (RLU, relative light unit)。

详情参考：www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/renilla-firefly-luciferase-dual-assay-kit.html