犬流感病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术（TaqMan探针），通过特异性引物和荧光标记探针靶向犬流感病毒（Canine Influenza Virus, CIV）的保守基因序列（如M基因或NS基因），实现病毒RNA的高灵敏度、高特异性定量检测。适用于犬鼻咽拭子、咽喉分泌物等样本的病原体筛查及载量分析。

技术优势

高特异性：引物及探针经优化设计，与犬副流感病毒、犬腺病毒等常见呼吸道病原体无交叉反应。

高灵敏度：检测限低至100–500拷贝/反应，可识别早期或低载量感染。

操作便捷：部分试剂盒采用一步式RT-qPCR技术，逆转录与扩增在同一反应管内完成，减少操作误差。

标准化质控：提供阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）和阴性对照，支持标准曲线绘制及实验有效性验证。

试剂盒组成

| 组分 | 规格 | 功能说明 |

| 2×qPCR MagicMix | 500 μL（预混液） | 含逆转录酶、DNA聚合酶、dNTPs |

| CIV通用引物混合液 | 100 μL | 特异性扩增靶序列 |

| FAM标记探针 | 50 μL | 荧光信号释放（FAM通道） |

| 阳性对照 | 50 μL | 标准曲线构建（1×10⁸拷贝/μL）|

| 阴性对照 | 50 μL | 无菌水，监控污染 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 样本及对照稀释 |

操作流程

1. 样本制备

提取样本RNA（推荐配套病毒RNA提取试剂盒）。

阳性对照需梯度稀释（10²–10⁷拷贝/μL）用于标准曲线。

2. PCR反应体系（20 μL）

2×qPCR MagicMix: 10 μL

引物混合液: 2 μL

探针: 1 μL

模板RNA: 2 μL

无菌水: 补至20 μL

3. 扩增程序

逆转录（一步法）: 50℃ 15分钟

预变性: 95℃ 5分钟

循环扩增（40 cycles）: 95℃ 15秒 → 60℃ 45秒（采集FAM荧光）

4. 适用仪器

ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche LightCycler等主流荧光定量PCR仪。

结果判读

阳性: Ct值 ≤ 35，扩增曲线呈S型。

阴性: Ct值 ≥ 40或无扩增。

灰区样本: Ct值35–40需复检。

定量分析: 以阳性对照log浓度与Ct值绘制标准曲线，计算样本病毒载量。

注意事项

防污染措施：严格分区操作，使用带滤芯枪头，避免交叉污染。

储存条件: -20℃避光保存，有效期12个月，避免反复冻融。

生物安全: 样本处理需在生物安全柜中进行，废弃物高压灭菌。

适用范围: 仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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